Re: [求救] 請問lentivius的問題~~十萬火急~~畢業困難

看板Biotech作者 (觀音兵)時間16年前 (2010/03/27 22:03), 編輯推噓6(6推 0噓 13→)
留言19則, 7人參與, 最新討論串3/3 (看更多)
我是指transfection 中研院買的shRNA到HEK293T細胞裡，只transfect一個質體進入細胞裡，打算做個測試，看48H後蛋白是否會下降。結果並無影響。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 134.208.25.184
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03/27 22:52, , 1F
EGFP有亮嗎?
03/27 22:52, 1F
推
03/28 01:14, , 2F
建議同時定序你的plasmids 有時候拿到的clone會出錯
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03/28 14:42, , 3F
有定序過，pEGFP transfection有發亮
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推
03/28 15:37, , 4F
那這跟lentivirus就沒有任何關係了啊~and 這個plasmid
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03/28 15:39, , 5F
本來就是設計在Lenti的system上用的,直接用效果並不好,實驗
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03/28 15:39, , 6F
室曾經也這樣試過,最後還是PACKAGE成VIRUS
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03/28 18:44, , 7F
我也想問 為啥直接用效果會不好呢? GFP會亮阿
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推
03/28 18:54, , 8F
跟U6 promoter不知道有沒有關係。
03/28 18:54, 8F
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03/28 19:13, , 9F
哎呀 我的promoter是CMV(我以為GFP都很亮就OK說@@" )
03/28 19:13, 9F
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03/28 19:14, , 10F
不就表示單單送入這個plasmid 就能產生protein嗎?
03/28 19:14, 10F
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03/28 19:14, , 11F
我把GFP剪下來換上我的taget gene...
03/28 19:14, 11F
推
03/28 19:57, , 12F
plasmids送進去以後做出的shRNA是造成mRNA degradation
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03/28 19:58, , 13F
要是你的protein比較stable的話 或許效果就會比較慢看見?
03/28 19:58, 13F
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03/28 20:36, , 14F
歹勢..我跟原PO不一樣 我做over-expression XD"
03/28 20:36, 14F
推
03/29 09:07, , 15F
之前有討論過 你要嘛直接挑stable不然就做viral infection
03/29 09:07, 15F
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03/29 09:07, , 16F
想直接transient送進去效果都很差
03/29 09:07, 16F
推
03/30 23:26, , 17F
跟PROMOTER應無關係~U6 promoter本來就是for polymeraseIII
03/30 23:26, 17F
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03/30 23:27, , 18F
你不管用什麼方式送進去 還不都一樣會表現
03/30 23:27, 18F
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03/30 23:27, , 19F
應該是Efficiency吧! 原po用什麼細胞做實驗?
03/30 23:27, 19F
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文章代碼(AID): #1BhX0UPH (Biotech)
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