Re: [求救] 目標蛋白無法以Pichia異源表現
※ 引述《littlelizard (專注)》之銘言：
: 大家好
: 最近在做異源表現的實驗
: 使用的是 Pichia 表現系統
: 表現的是我們實驗室發現的免疫調節蛋白 分子量約 13 kD
: 之前的學姊用 Pichia pastoris KM71 表現的時候就遇到無法表現的問題
: 目前我試過 Pichia angusta (Hansenula polymorpha) 和 P.pastoris KM71H
: 兩種 host 也都無法順利表現 = =
: 因為類似的蛋白做過很多 也都可以成功表現
: 所以我想應該不是誘導不成功的問題 (我用1% MeOH 誘導)
: 目前推測可能是 codon usage 的問題
: 但我比對了一下 並沒有連續低於10%的 codon
: 甚至其實都是很高 %
: 實在是不知道還有什麼原因造成無法表現 = =
: 只好來請問各位前輩有沒有類似的經驗?
: 以及可能的原因?
: 謝謝
我學長也是做異源表現的
他最近懷疑是不是因為有些DNA(exocytosis sequence) or protein後修飾的序列
在Pichia裡面不能被切掉
畢竟是不同物種
所以可以把這些序列切完後送進去看看
上禮拜跟學長聽的XD"
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◆ From: 140.109.55.232
推
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