Re: [討論] microinjection 的問題
1. 曾經打過10K的都OK，所以7.5應該是沒問題
2. 能表現螢光蛋白表示應該plasmid的時候是正常的
3. 不知道您注射經驗有多久?40個裡面只有1.2個表現，表示有可能您沒打好..
可能跑到水裡去了，沒有進細胞或卵黃囊
4. 線性化的過程，是不是有問題?是否切到螢光蛋白?或是切到promoter和螢光蛋白中間?
5. 24小時應該表現還是很強的時候，沒那麼快degrade..
以上，僅供參考..
※ 引述《chisarah (莎拉小姐)》之銘言：
: 近來我要把一個大約7500bps的plasmid 放進斑馬魚的胚胎中表現
: 首先我linearize了那個plasmid (大概7500bps)
: purify了之後就與純水和phenol red 混合在一起
: 把混合物打進斑馬魚的胚胎中
: 24小時後在顯微鏡下觀察螢光蛋白的表現情況
: 可是我做了幾次都沒有什麼東西表示出來
: 反而有一次直接把plasmid打進斑馬魚的胚胎中, 40個胚胎宥1, 2個表現了那個螢光蛋白
: 可是那個螢光是很弱的
: 是不是我用錯了restriction enzyme 去linearlize那個plasmid呢?
: 還是因為那個linearized plasmid 太長而在魚中degrade了呢?
: 有沒有人知道microinjection最多可打多大size的plasmid呢?
: 謝謝各位的解答!!!
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