Re: [求救] Coating Matrigel的疑問

看板Biotech作者icome (木村阿宅)時間14年前 (2009/10/26 19:03)推噓4(4推 0噓 11→)

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拍謝自己回自己文在一次偶然的google中，我找到答案囉!! http://cancerres.aacrjournals.org/cgi/reprint/54/13/3620.pdf 1994年的paper 日本人想出來的主要原理是在well壁上塗上石蠟，由於石蠟忌水的性質，會減低液體的附著力，所以液面不會形成凹陷，讓gel鋪得更加平整。最簡單的石蠟來源就是蠟燭，把蠟油滴在細長的工具末端(我是用拉開的迴紋針)，然後伸進去well塗抹，再用棉花棒把削渣弄掉。以上，給有相同問題的人參考!! ※ 引述《icome (木村阿宅)》之銘言： : 各位好~ : 我要做invasion assay，但是一直沒辦法很穩定地把matrigel coating好， : 常常會有細胞集中在中間的情況，可能是gel黏在外圍，導致中間有凹陷。 : 我目前coating的方法: : 1. 就每一well而言，將3ul matrigel稀釋在100ul的純水中。 : 2. 稀釋均勻後加入transwell中，自然風乾或是包好放進烘箱乾燥。 : 3. 放冰箱保存，之後直接使用。 : 我觀察到液面會因為附著力大於內聚力，而有凹面產生，是否因為這樣導致 : gel呈現盆地地形，所以細胞才會集中在中間? : 另一種方法是直接把十分之一稀釋的matrigel加進去(30ul)，可是這種方式一樣 : 容易發生gel黏聚外壁的情形。 : 另外，有的protocol會寫 "After coating, aspirate excess matrigel" 那是指什麼? : 讓matrigel沉澱然後吸掉上清液的意思嗎? : 請問我的作法要如何改進? 希望高手們分享自己的經驗和做法，感謝回答! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97

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