[求救] Coating Matrigel的疑問

看板Biotech作者 (木村阿宅)時間14年前 (2009/10/23 18:58), 編輯推噓1(105)
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各位好~ 我要做invasion assay,但是一直沒辦法很穩定地把matrigel coating好, 常常會有細胞集中在中間的情況,可能是gel黏在外圍,導致中間有凹陷。 我目前coating的方法: 1. 就每一well而言,將3ul matrigel稀釋在100ul的純水中。 2. 稀釋均勻後加入transwell中,自然風乾或是包好放進烘箱乾燥。 3. 放冰箱保存,之後直接使用。 我觀察到液面會因為附著力大於內聚力,而有凹面產生,是否因為這樣導致 gel呈現盆地地形,所以細胞才會集中在中間? 另一種方法是直接把十分之一稀釋的matrigel加進去(30ul),可是這種方式一樣 容易發生gel黏聚外壁的情形。 另外,有的protocol會寫 "After coating, aspirate excess matrigel" 那是指什麼? 讓matrigel沉澱然後吸掉上清液的意思嗎? 請問我的作法要如何改進? 希望高手們分享自己的經驗和做法,感謝回答! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97

10/24 14:23, , 1F
實驗前一天 把所有會跟matrigel接觸的容器(wll,tube)都放
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10/24 14:24, , 2F
4度C冰箱中,你的稀釋用水..有試過用medium稀釋看看嘛?
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10/24 14:26, , 3F
96-well ->50ul/well , loading完matrigel後 在well邊緣
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10/24 14:27, , 4F
一圈加上 1xPBS 潤濕 之後放入37度C培養箱 凝膠
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10/24 23:14, , 5F
放 冰箱一天 +1
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10/26 10:32, , 6F
OK 我試試看
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文章代碼(AID): #1AuOn52k (Biotech)
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