[求救] hybridoma的問題,融不出來Orz
目前我是照著實驗室的protocol做,基本上跟台大莊教授的流程差不多
不過融了快10隻都出不來,快哭死了,完全都是在燒錢T口T
狀況最佳的幾次是在day 3~day 5左右還有數顆細胞存活,大概2,3顆聚集在一起
這些應該是有成功融出的融合瘤細胞,不過最後還是完全沒繼續生長&存活
目前想出的問題是
操作過程失當&無菌操作:不過以我這幾次的經驗我覺得完全不可能
feeder cell:不過看了很多paper,很多人在做融合時也並未使用
PEG:看了幾個protocol,有人在加入PEG時會順便攪拌一下細胞,或是靜置數分鐘
然後再加入media(RPMI 1640,DMEM)或PBS做wash
myeloma cell:代數過高?基因型改變?
然後有人是直接將做完PEG&wash動作後離心下來的cell pelet不打散直接移到flask培養再做分盤(分到96孔盤)
而我是加入PEG>加入RPMI 1640>離心>加HAT medium將細胞沖散>直接分裝到96孔盤
這兩個步驟的差異會對融合成功率產生影響嗎?
有經驗的高手能提供一些意見嗎O_Q
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