Re: [求救] SiRNA transfection knockdown target …
看到這裡~~
想跟大家請教一個問題
在paper上~~常常看到跟siRNA還有一些veter的比例
都會使用N/P ratio
N指的是nitro P是phospate
那在做實驗時~~
我們怎麼去作或是測量N/P ratio
還是他只是分別只N(veter)和P(siRNA)的比例罷了
※ 引述《chxx (忍一時風平浪靜!! NＩ》之銘言：
: ※ 引述《terrylin17 (快意)》之銘言：
: : 請問各位大大
: : 我目前實驗主軸是 SiRNA的transdection 作 基因knockdown的實驗
: : 使用的輔助劑是用 invitrogen買的 lipofatamine2000
: : 條件基本上是抓
: : 5 ul lipo + 2.5 ul SiRNA
: 這段話基本跟沒說一樣
: 你是在什麼plate上做的
: 是6-wll plate還是12 ,24, 96
: 或是你在dish做的?
: 你要說lipofectamine占的%比較有意義
: 另外2.5uL siRNA的什麼樣的濃度的stock
: 你要說siRNA的final conc.是多少nM才比較有意義
: : transfection 6hr後再加入30%FBS medium
: : 我是做cell culture 的 SiRNA knockdown
: : 但是knockdown的效果並不是很穩定.....
: 你是說你每次transfection完都做western或qPCR
: 然後Knock down的程度都不同嗎
: : 但是我又不能再換其他種的transfect方法
: : 請問有人也有做過類似的實驗嗎 ?
: : 請教各位了 謝謝
: 我對lipofectamine有點感冒
: 你可以試試Dharmacon的HiPerfect reagent
: 他總共有四種 網站上的manuel有適合的Cell line的資料
: 你可以試試
: 我之前對某一種rat 的beta-cell line做transfection
: Dharmacon的可以多knock down 20% (同一個siRNA)
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推
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