Re: [求救] SiRNA transfection knockdown target …
※ 引述《terrylin17 (快意)》之銘言：
: 請問各位大大
: 我目前實驗主軸是 SiRNA的transdection 作 基因knockdown的實驗
: 使用的輔助劑是用 invitrogen買的 lipofatamine2000
: 條件基本上是抓
: 5 ul lipo + 2.5 ul SiRNA
這段話基本跟沒說一樣
你是在什麼plate上做的
是6-wll plate還是12 ,24, 96
或是你在dish做的?
你要說lipofectamine占的%比較有意義
另外2.5uL siRNA的什麼樣的濃度的stock
你要說siRNA的final conc.是多少nM才比較有意義
: transfection 6hr後再加入30%FBS medium
: 我是做cell culture 的 SiRNA knockdown
: 但是knockdown的效果並不是很穩定.....
你是說你每次transfection完都做western或qPCR
然後Knock down的程度都不同嗎
: 但是我又不能再換其他種的transfect方法
: 請問有人也有做過類似的實驗嗎 ?
: 請教各位了 謝謝
我對lipofectamine有點感冒
你可以試試Dharmacon的HiPerfect reagent
他總共有四種 網站上的manuel有適合的Cell line的資料
你可以試試
我之前對某一種rat 的beta-cell line做transfection
Dharmacon的可以多knock down 20% (同一個siRNA)
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◆ From: 140.247.238.43
推
09/19 12:43, , 1F
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