Re: [求救] SDS-PAGE時sample聚焦的效果很糟

看板Biotech作者glencan (為了更好的未來)時間16年前 (2009/08/18 23:34)推噓5(5推 0噓 8→)

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※ 引述《egoweaver (Hiko)》之銘言： : 最近在跑膠的時候一直有這個問題。查了一些資料都指向是因為buffer pH的問題，但是實 : 驗室裡其他人用同一組buffer來鑄膠卻沒有發生類似的問題，所以自己檢討一下覺得比較 : 可能出問題的有以下幾點: : 1.配膠的時候mix不均勻 : 2.為了怕上膠因為漏掉而有well塌掉所以用了配方的兩倍的APS和TEMED(希望它快點凝) : 3.完全是操作者的技術問題，大概是哪裡出包而且還沒看出來…… : 想請問以上有哪些可能會使sample不會乖乖停在上下膠交界的。 : btw,我跑膠是用65V(35min)-120V(跑到dye跳海)，最近每次timer響要過去看的時候sample : 和marker都已經衝過去了…… 恩逗...sample無法聚焦我以前也有遇過... 那時候是因為跑的太久了糊掉. 也有另一個可能是跑太快(電流太高), 在stacking的部分就沒有跑好,所以後來band就會糊糊的. 另外,請問一下原po,你們load都是同樣量的蛋白質嗎? ============================================================================== 關於2. AP粉量太多好像會造成蛋白質無法分離均勻是不是? 還是我記錯了 @@ 怕上膠漏掉~我的做法是,在配的時候先把spacer填滿,滿到快要溢出來那樣, 大概等個1~3分鐘,再把comb放上去. (別等太久,不然等膠有點凝的時候再放comb,well會很難看) 或者,也可以把轉漬後的膠拿去stain,看看是不是只有全部的band都是這樣, 還是只有single band有這樣的狀況... 以上是我有遇過的狀況以及我的解決方法,如果有錯誤也歡迎各位一起討論啦 ^^a 因為我也想知道有哪些解決方法的說 ===============================以下提外話================================== 關於之前提到的組織做western,目前改善多了...(不過還有很多的進步空間 = ==) 就...sonicate久一點這樣...(疑似染色體DNA搞的鬼 == ==+) 然後RIPA的量也加多一些,去稀釋它的濃度... 總之,現在western比較能看了,不過band還是滿糊的, 要修正的還很多...唉唉唉 Q皿Q -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.227.179

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