Re: [求救] 成功不了的TRANSFORMATION(定點突變)
※ 引述《john00300j (憨憨)》之銘言：
: 有附COMPETENT CELL，不過老師有說過我們的DNA無法在他附的COMPETENT CELL表現，所以採用我們自己另外買的
我猜你們老師是想要省一步所以用BL21下去做transform吧?
猜測省下轉換strain的部份
一般:
mutaion PCR->跑膠確定primer work(site direct PCR成功取決於primer)
->transform into apporiate competent cell
->blue/white screen->挑菌或colony PCR->Mini->抽plasmid->定序-> Maxi(或省略)
->transform in to BL21 and express protein.
invitrogen那套site direct kit剛剛看了他用的competent cell是用DH5A-T1R
http://tools.invitrogen.com/content/sfs/manuals/oneshotdh5at1r_man.pdf
裡面有寫到這株菌本身不需要IPTG去induction lac promoter 自己就可以表現lac
所以如果用的是pET系列應該不用擔心這問題吧? (看到BL21就直覺想到寵物系列orz)
不過你老師考量的似乎不是這點...
另一點是BL21裡面的DNA replication跟repair有被修過嘛?
(因為不知道哪種你用的是哪一種BL21..)
linear form的DNA進去會不會被當成外來的直接分解掉 或者BL21有辦法把它接成
circular form?
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