[求救] 成功不了的TRANSFORMATION(定點突變)

看板Biotech作者 (家low)時間16年前 (2009/08/14 23:44), 編輯推噓5(5推 0噓 16→)
留言21則, 8人參與, 7年前最新討論串1/3 (看更多)
我目前是在做定點突變，使用INVITROGEN KIT，但是PCR後的產物作TRANSFORM後 使用BL 21， 無法長出任何COLONY，請問有經驗的高手是否能提供依些可能的原因? ^Q -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.112.174.9
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08/14 23:57, , 1F
產物對細菌有毒性?
08/14 23:57, 1F
推
08/15 00:32, , 2F
kit裡面不是有附competent cell?
08/15 00:32, 2F
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08/15 01:00, , 3F
PCR產物是有clean過 ，但dna對細菌應該是無毒性，除非
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08/15 01:01, , 4F
是因為突變過後?? 有這個可能嗎??
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08/15 01:02, , 5F
有 但他付的COMPETENT CELL我們DNA無法表現
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08/15 01:05, , 6F
作好多次都做不出來 快昏了@@+
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08/15 01:49, , 7F
我指的是蛋白質產物有毒性 / 或是用錯抗生素?
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08/15 02:02, , 8F
先看competent cell長不長得出來再說..
08/15 02:02, 8F
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08/15 02:25, , 9F
抗生素是確定的 而"突變後"蛋白質產物有無毒性不知道
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08/15 02:26, , 10F
我也有朝這方面懷疑 不過不能肯定
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08/15 02:27, , 11F
COMPETENT CELL做過CONTROL 是健康的^^
08/15 02:27, 11F
推
08/15 04:05, , 12F
我們家enzyme那些是都分開買 做得滿ok的
08/15 04:05, 12F
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08/15 04:47, , 13F
我有做過另一點，是OK ，唯獨此點= =不知道發生甚麼事
08/15 04:47, 13F
推
08/15 07:02, , 14F
我有用過kit附的 跟我們家自己做的DH5a 都ｏｋ
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推
08/15 07:07, , 15F
原PO的DNA如果是用做轉染細胞的construct 應該不用擔心毒性
08/15 07:07, 15F
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08/15 07:08, , 16F
的問題＠＠..
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推
08/15 07:17, , 17F
先用kit附的compotent cell做出DNA再送BL21
08/15 07:17, 17F
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08/15 22:54, , 18F
恩 是喔~，所以蛋白部會有毒了，那就又排除了一個可能@
08/15 22:54, 18F
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08/15 23:16, , 19F
先謝謝大家的寶貴意見及經驗
08/15 23:16, 19F
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11/11 01:41, , 20F
抗生素是確定的 而"突 https://daxiv.com
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01/03 16:59, 7年前 , 21F
先謝謝大家的寶貴意見及 https://noxiv.com
01/03 16:59, 21F
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文章代碼(AID): #1AXOPlyc (Biotech)
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