[求救] 組織均質後做western

看板Biotech作者glencan (為了更好的未來)時間16年前 (2009/08/12 01:15)推噓1(1推 0噓 4→)

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最近取大鼠的肌肉組織,均質(homogenize)後定量進行western看蛋白質表現電泳時遇到一個問題, sample很濃稠,要load進well的時候好像"思樂冰"一樣勾勾的, 電泳後膠的well上也有一點點殘留物(不知道是什麼) 洗片後也是白皙皙 QQ 感覺好像蛋白質都沒有被分離開or依然卡在well上一樣...Q皿Q 請問這是發生什麼事? 會是什麼原因? 有什麼改善方法嗎? 謝謝 ====================================================================== 我在均質的時候就直接將組織放在1.5cc的eppendorf加入RIPA,然後就直接均質, 4度C 13000轉 10分鐘離心後取上清液定量,-20度保存上清液的顏色是有一點那種淡淡的血水那種感覺............ (有點像豬肉解凍後低下來的血水那樣) (這情形讓我很不安...這是正常狀況嗎?) 喔...對了...我大約是0.2mg左右的tissue配300ul的RIPA下去均質, 定量後蛋白質量接近 1ug/ul (大約0.9X左右) western時,蛋白質取的量是 40ug/well 之前有試過,將其中一支用不到的sample死馬當活馬醫: 我在電泳前又在sample加入RIPA稀釋,就不會這樣勾勾的, 不過洗片依然"白帥帥" T皿T 我在想應該是RIPA把蛋白質給稀釋過頭了,所以表現量低到偵測不到... 也試過homogenize後再用sonication震一次, 但效果也沒有多好... 是我sonicate震太小嗎? 或是? 找了些資料也有爬過精華區,不過沒看過類似我這樣的狀況... 做實驗遇到這種"前無古人後無來者"... 實在是好討厭的感覺呀~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~>"< -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.171.64.227

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missoul

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glencan

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推

hchs890843

08/12 23:59, , 3^F

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