[求救] 有關protein純化

看板Biotech作者 (寂寞東京鐵塔)時間16年前 (2009/08/04 21:57), 編輯推噓3(3推 0噓 2→)
留言5則, 5人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
最近我在純化protein時一直有無法denature完全的問題 我們純化的protein是inclution body 我們目前是用6M urea去denature 破菌後的離心pellet denature 兩小時後再離心取上清液去通Nico column denature時也確實有混合均勻 但跑SDS-PAGE出來的結果 還是發現有很多protein殘留在不要的pelet裡 想請問真的是需要提高濃度才能完全純化出我們要的蛋白嗎 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.115.48.40
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08/04 22:03, , 1F
離完心之後再用一些buffer去回溶看看還能不能溶出東西
08/04 22:03, 1F
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08/04 22:08, , 2F
就是溶完跑PAGE發現還是沒denature出來......
08/04 22:08, 2F
推
08/04 23:06, , 3F
也可以試試看增長denature的時間，我自己是放在冷房過夜
08/04 23:06, 3F
推
08/05 11:37, , 4F
提高溫度 或 延長時間 或加入DTT or β-ME 或用 GdnHCl
08/05 11:37, 4F
推
08/12 21:29, , 5F
我只前都是用超音波破菌的，效果來不錯
08/12 21:29, 5F
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文章代碼(AID): #1AU3vMt8 (Biotech)
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