Re: [求救] Western 的 band 被擠壓到
※ 引述《pytforyou ()》之銘言：
: 大家好
: 我最近做的 Western Blotting
: Band 都會被擠壓到
: 而且大都在中間區域的位置
: 不論是大分子量或是小分子量
: 我們實驗室從做膠到 transfer 都是用 Bio-Rad 的系統
: 圖片：http://www.wretch.cc/album/album.php?id=popopaul34&book=5
: 這張圖我秀的算是大分子量的位置
: 大約是在 55kDa 的位置
: 同一張 Blot 大約 25kDa 的位置
: 也有相同的情形發生
: 但是更為嚴重一些
: (24kDa 那邊從 lane 2 到 lane 7
: 都是一樣的狀況)
: 我想問的問題是
: 在 lane 4 和 lane 5 的位置
: 發生了什麼事情？
: 我跟實驗室的人討論過
: 有人覺得是大泡泡的影響
: 有人覺得是被擠壓到
: 我個人覺得不是泡泡
: 因為我在做 transfer 的時候
: 都很仔細的看
: 而且我也有請別人幫我確定有沒有泡泡
: 所以我覺得應該不是泡泡的影響
: 不過擠壓到的話
: 我也覺得怪怪的
: 因為我都挑很鬆的那種 transfer casette
: 我一定不會硬擠進去
: 另外
: 我問過一個 sales
: 她說有可能是膠沒做好
: 她說有可能是因為膠凝的太快
: 而且膠做的不均勻
: 於是我按照板上其他大大的做法
: APS 和 TEMED 的比例為 10:1
: 全部配好之後
: 我用 droper 加到玻璃裡面
: 大約要等 30 分鐘才會凝固
: 以上是 Resolving gel (下膠)的部份
: (我覺得膠做的還滿漂亮的
: 因為下膠和上膠中間的那條線很直
: 不過純屬感覺)
: 我們實驗室其他人做
: 大都不會遇到這樣的問題
: 不過我個人遇到這樣的問題機率很高
: 基本上每次做兩片就至少一片會有這樣的狀況
: 昨天做四片有三片都這樣
: 而這樣的問題困擾我許久了
: 因此想問問看大家的意見
: 看看是否能夠改善
: 麻煩大家幫我想想了
: 如果有任何需要的資訊
: 只要在不損害實驗室權利的狀況下
: 我將不吝提供
: 感謝各位了
: 以方便板友幫您追蹤問題
-------------------------------上次問題的分隔線-----------------------------
首先要先感謝一下板上的強者們
因為我的問題解決了
我後來在做 transfer 的時候
在 transfer tank 中加了一個小小的 stir bar
接著，一邊快速旋轉著 stir bar，一邊 transfer
然後所有的問題都解決了
現在每一條 band 都美美的
真的是很感謝大家給我的意見
可是我又有疑問了
為什麼大家都用一樣的方法做實驗
可是卻只有我會有 buffer 溫度(濃度)不均勻的問題呢？
是我做實驗的習慣問題？
還是我的手氣比較不好？
想請大家再給我一些指教！
感恩～感恩～
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.208.45
推
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