[求救] Western 的 band 被擠壓到

看板Biotech作者pytforyou時間16年前 (2009/07/15 12:01)推噓4(4推 0噓 10→)

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大家好我最近做的 Western Blotting Band 都會被擠壓到而且大都在中間區域的位置不論是大分子量或是小分子量我們實驗室從做膠到 transfer 都是用 Bio-Rad 的系統圖片：http://www.wretch.cc/album/album.php?id=popopaul34&book=5 這張圖我秀的算是大分子量的位置大約是在 55kDa 的位置同一張 Blot 大約 25kDa 的位置也有相同的情形發生但是更為嚴重一些 (24kDa 那邊從 lane 2 到 lane 7 都是一樣的狀況) 我想問的問題是在 lane 4 和 lane 5 的位置發生了什麼事情？我跟實驗室的人討論過有人覺得是大泡泡的影響有人覺得是被擠壓到我個人覺得不是泡泡因為我在做 transfer 的時候都很仔細的看而且我也有請別人幫我確定有沒有泡泡所以我覺得應該不是泡泡的影響不過擠壓到的話我也覺得怪怪的因為我都挑很鬆的那種 transfer casette 我一定不會硬擠進去另外我問過一個 sales 她說有可能是膠沒做好她說有可能是因為膠凝的太快而且膠做的不均勻於是我按照板上其他大大的做法 APS 和 TEMED 的比例為 10:1 全部配好之後我用 droper 加到玻璃裡面大約要等 30 分鐘才會凝固以上是 Resolving gel (下膠)的部份 (我覺得膠做的還滿漂亮的因為下膠和上膠中間的那條線很直不過純屬感覺) 我們實驗室其他人做大都不會遇到這樣的問題不過我個人遇到這樣的問題機率很高基本上每次做兩片就至少一片會有這樣的狀況昨天做四片有三片都這樣而這樣的問題困擾我許久了因此想問問看大家的意見看看是否能夠改善麻煩大家幫我想想了如果有任何需要的資訊只要在不損害實驗室權利的狀況下我將不吝提供感謝各位了以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.208.45

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bluerstars

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推

tchan

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pytforyou

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