Re: [求救] 請問貼不緊的神經細胞要怎麼免疫染色?

看板Biotech作者 (墮天使)時間15年前 (2009/07/07 00:45), 編輯推噓2(2010)
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: → LIAR:請問是哪個步驟離心? 06/28 21:35 : 推 tsubasawolfy:fix之前 06/28 22:24 : → LIAR:可是我固定前有看顯微鏡,那時還是貼的啊,這樣離心還有用嗎? 06/28 22:28 : 推 supray:操作時well會乾掉嗎? PBS吸走要馬上補 06/30 22:37 : → supray:乾掉了 鹽析出 細胞就飄了 06/30 22:38 : → supray:正常 4% paraformaldehyde fix 5 min 就 OK了 06/30 22:40 : 推 REIDO:請問t大,1200g會不會太大啊? 07/04 12:30 我星期六先離心1200g 5min,之後就用平常的protocol,結果到blocking完去看 顯微鏡,之前會跑掉的cell現在竟然大部分都還乖乖在那裡,一整個爽到爆。 問題是我一抗over day,星期一要PBS前再看顯微鏡,原本貼不緊的還是跑起來了, 看來離心的效果不是長期的。請問還有別的方法可以解決這種貼不緊的問題嗎? 該不會要室溫從頭做到尾,而且每個步驟都離心一次吧?還是說一開始固定前就 離快一點或離久一點? -- 太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭, 這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.22.47

07/07 00:52, , 1F
書上只寫了一次離心後fix 而且理論上fix的目的之一
07/07 00:52, 1F

07/07 00:54, , 2F
也是要把細胞黏在slide上...是有寫到formaldehyde
07/07 00:54, 2F

07/07 00:54, , 3F
fix的缺點是在水溶液中太久後那些crosslink會脫離
07/07 00:54, 3F

07/07 01:00, , 4F
看要不要再加個-20度MeOH 5-10分鐘去precipitate
07/07 01:00, 4F

07/07 01:02, , 5F
假如用到MeOH的話就不用再加triton或NP40去打洞了
07/07 01:02, 5F

07/07 23:45, , 6F
MeOH是讓protein沉墊到骨架上嗎?這樣cell應該還是會掉吧?
07/07 23:45, 6F

07/07 23:52, , 7F
目前我知道的固定有paraformaldehyde,MeOH,EtOH,aceton等等
07/07 23:52, 7F

07/07 23:57, , 8F
不過實用上要依據什選還是不懂,唯一有印象的好像是膜蛋白
07/07 23:57, 8F

07/07 23:57, , 9F
不能用MeOH,會溶掉膜的樣子.....
07/07 23:57, 9F

07/07 23:58, , 10F
不過我最需要的應該還是能讓細胞不會跑掉的固定就是了XD
07/07 23:58, 10F

11/11 01:34, , 11F
也是要把細胞黏在sli https://daxiv.com
11/11 01:34, 11F

01/03 16:57, 5年前 , 12F
fix的缺點是在水溶液 https://daxiv.com
01/03 16:57, 12F
文章代碼(AID): #1AKYed3N (Biotech)
文章代碼(AID): #1AKYed3N (Biotech)