[求救] 請問貼不緊的神經細胞要怎麼免疫染色？

看板Biotech作者 (墮天使)時間15年前 (2009/06/28 20:19), 編輯推噓5(5推 0噓 15→)
留言20則, 6人參與, 5年前最新討論串1/2 (看更多)
我做的是不同材料對小腦神經的培養，老師想看在某些貼不緊的情況下， 免疫染色的分部。 問題是，我只要把paraformaldehyde和triton一加下去，幾乎細胞就都浮起來了， 會看到細胞的地方只剩well的邊邊，或是整個溶液表面(也就是浮起來了)。 不過這兩個地方的型態或多或少會不太一樣，像是無法維持張力的感覺。 我用48well，步驟如下： 4% paraformaldehyd 150ul 20min 0.1% triton 150ul 20min PBS 200ul 20min 2% BSA 200ul 1h 我特地減少PBS的次數，而且抽和加入時都用200 ul tip很緩慢的處理，但會浮起來的 還是浮起來了。請問我應該怎麼解決浮起來的問題呢？ -- 太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭， 這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.22.47
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06/28 20:28, , 1F
你的PBS應該是沒有Ca2+跟Mg2+的吧，改用medium或HBSS？
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06/28 20:49, , 2F
是的，我沒有Ca和Mg，但都死掉了為什麼會有影響呢？
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推
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要不要用fix suspension cell的方法XD
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06/28 21:19, , 4F
願聞其詳，不過我那是原本就貼著的neuron喔！
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推
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suspension有兩種 一個是要用特殊離心機 一個是poly
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L-Glysine去吸附細胞 既然你的已經在48well裏面
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可以離心看看
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特殊離心機是cytocentrifuge離1200g 5-10min
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6.24.48.96well的plate好一點的離心機都有支援
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請問是哪個步驟離心？
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推
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fix之前
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可是我固定前有看顯微鏡，那時還是貼的啊，這樣離心還有用嗎?
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推
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操作時well會乾掉嗎? PBS吸走要馬上補
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乾掉了 鹽析出 細胞就飄了
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正常 4% paraformaldehyde fix 5 min 就 OK了
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推
07/04 12:30, , 16F
請問t大，1200g會不會太大啊？
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我用過離心了，雖然剛離完細胞有點不太一樣，但blocking時看
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就OK了，還有大部分留著，感謝各位的幫忙。
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願聞其詳，不過我那是原 https://daxiv.com
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01/03 16:57, 5年前 , 20F
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文章代碼(AID): #1AHr_4K2 (Biotech)
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