[求救] 關於RT-PCR的一些問題
老師希望我把某種酵母菌的某個基因一個踢除
另一個置於一個調控式的promoter的下游
藉由抑制此promoter去看此基因扮演的腳色
有看到預期的型態改變
也做了Southern確定基因確實被改成我們所想的那樣
現在老師希望看mRNA是否真的有下降 就希望我做RT-PCR確定
因為抑制此promoter大約只能抑制80%的表現 還會有大約20%的表現
結果做了RT-PCR發現沒有什麼差別
cycle數也試過很多種不同的 都看不太到希望的差異出現
有想過會不會是差異被PCR放大所以看不到
再來因為我基因全長是1500bp 也有現有的primer
所以就用此primer去夾 不知道假如我縮短夾出的片段 會有意義嗎
夾個大約500左右 有沒有可能會有差異出現???
(因為亂想想說會不會片段比較長 比較不好夾 讓差異減少了@@)
因為實驗室都沒人做過關於RNA方面的實驗
所以我是亂想的 不知道還有沒有其他地方可以調整 藉此用RT-PCR看出差異
不然我又要去摸索怎麼做real-time或是Northern了
感謝耐心看完的大大 也希望有大大可以給我一些意見
因為離畢業沒多少時間了 拜託了~非常感謝^^
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