Re: [求救] ligation怎麼接都接不出來

看板Biotech作者 (Davideason)時間16年前 (2009/05/11 14:37), 編輯推噓3(3推 0噓 10→)
留言13則, 5人參與, 7年前最新討論串4/4 (看更多)
PCR cycles 數有點高 不過跟您的問題 相關性比較小 Invitrogen 的白金牌 Taq 應該只是準確性高的 Taq 沒有 proof reading (應該巴~大叔懶得查了) 這隻Taq 也不需要另外加其他的Taq 即可用來作 TA 所以 我猜問題是出在 competent cell 可能您用的那種因為insert 太大轉進去 cell的效率就很差 解決方式 要馬 作作 heat shock > 馬上插冰上 > 塗盤 結果 我猜 應該會改善 或者 建議您去買 RBC 出的 HIT Competent Cell (我們家 是跟惠眾買一隻80) DNA 加一加不用 heat shock 就可以塗盤了 一整個好用 老實說 insert 3K 真的還好~ 我還比較害怕 80-90bp的小片段 祝您實驗順利 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.52.139
推
05/11 19:54, , 1F
RBC是益生的離職員工做的
05/11 19:54, 1F
→
05/11 19:55, , 2F
簡單說技術是偷益生的 效率應該是差不多
05/11 19:55, 2F
推
05/11 20:26, , 3F
兩家都買過,但HIT品管不好,有混到帶抗藥性菌株
05/11 20:26, 3F
→
05/12 09:45, , 4F
挖賽~還有這層關係喔~anyway~樓上可以跟我透露混到哪種
05/12 09:45, 4F
→
05/12 09:46, , 5F
抗性的細菌嗎~大叔我最近操作gateway系統發現一些怪象
05/12 09:46, 5F
→
05/12 09:49, , 6F
雖然都能順利解決~不過也是有點懷疑是不是勝住細胞
05/12 09:49, 6F
→
05/12 09:52, , 7F
因為在Spec的篩選下~有些透明的colony根本P不到抽不到
05/12 09:52, 7F
→
05/12 09:53, , 8F
plasmid(我操作的是3.5K native promoter+ORF)
05/12 09:53, 8F
→
05/12 09:54, , 9F
不過那也是在 LR反應之後 , 所以 很難說是什麼原因
05/12 09:54, 9F
推
05/13 21:58, , 10F
E. coli受不了大量表現，都死光了，所以你都挑不到
05/13 21:58, 10F
→
05/13 21:59, , 11F
當然這要你的2K片段是基因，然後somehow自己轉譯了...
05/13 21:59, 11F
→
11/11 01:28, , 12F
RBC是益生的離職員工 https://muxiv.com
11/11 01:28, 12F
→
01/03 16:55, 7年前 , 13F
不過那也是在 LR反應 http://yofuk.com
01/03 16:55, 13F
‣ 更多 davideason 的文章
文章代碼(AID): #1A1yUisZ (Biotech)
‣ 更多 davideason 的文章
文章代碼(AID): #1A1yUisZ (Biotech)