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討論串[求救] ligation怎麼接都接不出來
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#4
Re: [求救] ligation怎麼接都接不出來
推噓3(3推 0噓 10→)留言13則，0人參與, 7年前最新作者davideason (Davideason)時間16年前 (2009/05/11 14:37), 編輯資訊
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PCR cycles 數有點高 不過跟您的問題 相關性比較小. Invitrogen 的白金牌 Taq 應該只是準確性高的 Taq. 沒有 proof reading (應該巴~大叔懶得查了). 這隻Taq 也不需要另外加其他的Taq 即可用來作 TA. 所以. 我猜問題是出在 competent
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#3
Re: [求救] ligation怎麼接都接不出來
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者ayuba時間16年前 (2009/05/11 12:33), 編輯資訊
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※ 引述《a89824704 (wen)》之銘言：依照promega的建議我做過: RT 1hr 再 4度C O/N. 16度C O/N. RT O/N 結果都跟我下面描述的一樣. 我也做過一次positive control:白:藍約70:30. 及background control:有白色的c
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#2
Re: [求救] ligation怎麼接都接不出來
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者micocat (de novo)時間16年前 (2009/05/09 16:53), 編輯資訊
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A tail是加在二端 跟product長度應該汲關係. digest 完全的情況下 vector跟insert的莫耳數是一樣的 (個數一樣多). 而vector是3k insert 0.6~0.8k. 所以vector"重量" 比insert 大 有比較多 minor groove. 染出來比較亮
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#1
[求救] ligation怎麼接都接不出來
推噓3(3推 0噓 3→)留言6則，0人參與, 最新作者ayuba時間16年前 (2009/05/09 03:42), 編輯資訊
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我的insert大小2kb要接到pGEMT Easy(3kb)裡. PCR用的Taq是invitrogen的Platinum® Taq DNA Polymerase High Fidelity. PCR的condition是94 2min. 94 30sec ---. 55 30sec |- 35c
(還有1231個字)
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