Re: [討論] DEPC的使用方法
※ 引述《raxjimmy (rearrangement)》之銘言：
: 有幸要開始抽RNA了
: 上次也問過大家知道直接抽total RNA就可以了
: 因為我們很久沒做過
: 所以我去別人實驗室問他們的做法
: 他們用具是開一套新的塑膠離心試管在RNA區專用
: 而玻璃器材等等就用DEPC水用噴霧噴噴擦一擦然後滅兩次菌
: tip則是直接滅兩次菌
: 這樣會太簡陋嗎?
: 話說說我們的老闆嚴格多了XD
: 剛處理完一批東西被罵
: 老闆說要全部浸泡DEPC水
: 而且連tip也要泡
: 簡單的說就是要用什麼就全部都泡水
: 泡完水全部都用150度烘五個小時(除了會溶化的)
: 烘完之後再全部拿去滅菌
: 滅菌之後再全部拿去烘5小時
: 這兩個超極端的......
: 讓我有點不太能適應= =
: 所以想請問一下各位RNA專用器材都怎麼處理的
其實真的不用太害怕
尤其假如你是用trizol抽的話
裡面就含GUANIDINE THIOCYANATE
是RNase的inhibitor
critical point是在加insopropanol後
因為沒有GUANIDINE THIOCYANATE保護
像推文說得你假如是用水+DEPC處理overnight 接著滅菌後的水
只是裡面沒有RNase
拿來噴東西沒有任何用
假如你說用水+DEPC後沒滅菌前拿來噴用具
那些用具再拿來滅菌 照理說應該可以去RNase
但DEPC會致癌耶
你真的要這樣做嗎 難道你全部都要在hood操作?
只是增加麻煩罷了
以下有篇ambion(abi)的文章
RNase and DEPC Treatment: Fact or Laboratory Myth
http://www.ambion.com/techlib/tb/tb_178.html
裡面指出滅菌也可以去除一定程度的RNase
而且還有許多處理RNA相關的基礎知識
可以看看 我之前也研究了很久
所以我覺得手法還是比較重要拉 跟無菌操作一樣
會污染的人就是會汙染 噴再多酒精 點再多酒精燈都一樣
我以前老闆都不太噴酒精也不點酒精燈的
也不會汙染
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◆ From: 140.112.84.225
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