[討論] DEPC的使用方法

看板Biotech作者 (rearrangement)時間15年前 (2009/05/06 13:57), 編輯推噓7(7推 0噓 22→)
留言29則, 8人參與, 5年前最新討論串1/2 (看更多)
有幸要開始抽RNA了 上次也問過大家知道直接抽total RNA就可以了 因為我們很久沒做過 所以我去別人實驗室問他們的做法 他們用具是開一套新的塑膠離心試管在RNA區專用 而玻璃器材等等就用DEPC水用噴霧噴噴擦一擦然後滅兩次菌 tip則是直接滅兩次菌 這樣會太簡陋嗎? 話說說我們的老闆嚴格多了XD 剛處理完一批東西被罵 老闆說要全部浸泡DEPC水 而且連tip也要泡 簡單的說就是要用什麼就全部都泡水 泡完水全部都用150度烘五個小時(除了會溶化的) 烘完之後再全部拿去滅菌 滅菌之後再全部拿去烘5小時 這兩個超極端的...... 讓我有點不太能適應= = 所以想請問一下各位RNA專用器材都怎麼處理的 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.13.115.38
推
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DEPC水只是用DEPC前處理消除水中的RNase活性,高溫滅菌後,指
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能視為乾淨的水,拿實驗耗材去浸泡DEPC水,很難想像有效果
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別人實驗室的配法是0.1%DEPC配成75%酒精來擦器材
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不如將實驗器材浸泡雙氧水,這種做法還比較普遍
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我提議了 但是老闆很堅持RNase inhibitor的這個效果
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所以滅菌和烘的效果反而會比DEPC效果好嗎???
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噴DEPC水滅菌就好了
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樓上那個DEPC水是二次滅菌水+DEPC沒錯吧?
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推
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其實一般的高熱高壓滅菌是沒辦法去除RNase的,我以前的作法是
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玻璃製品210度乾熱滅菌16小時,塑膠製品4%(忘了)雙氧水處理1h
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再烘乾使用,頂多再滅菌...tip之類的因為是機器製造,所以不應
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會有RNase存在,所以頂多滅菌...不過施主你的問題是"老闆"
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這樣感覺雙氧水挺好用的 DEPC賣超貴的說= =
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所以溝通不行的話還是照老闆的話去做吧,以免做了還被懷疑數
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只不過是去除一個酵素 買到100ml一萬多的東西來泡澡XD
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據,我的方法是參閱molecular cloning RNA操作處理的步驟
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這樣我大概知道標準程序了 感謝各位大大QQ
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不過你要做RNA實驗的水溶液也都是要用DEPC配,所以還是買吧
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有跟別人借拉XD 是因為要泡澡所以才會要買 總不能用光嘛
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實驗不穩時，還是老闆最大
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推
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二種方法都先小量試過 從自已結果決定要用哪一種
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泡DEPC水又沒用 先想想原理吧 DEPC水是水裡沒有RNase
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不是DEPC水可以拿來去RNase
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我用的有分 滅菌水+DEPC拿來噴東西的
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水+DEPC在拿去滅菌的就是RNase free水
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不過DEPC超噁的味道 還是雙氧水感覺健康些XD
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DEPC會致癌 不要聞比較好 哀...老闆要逼死人嗎
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我提議了 但是老闆很堅 https://noxiv.com
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01/03 16:54, 5年前 , 29F
有跟別人借拉XD 是因 https://muxiv.com
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文章代碼(AID): #1A0IQiha (Biotech)
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