Re: [求救] Western Blotting的問題
※ 引述《sjacky (陳小文)》之銘言：
: 工作關係，開始接觸Western
: 剛開始學習，目前還算順利
: 其中遇到一個問題
: SDS-PAGE->Transfer->1st Antibody->2nd Antibody->壓片
: 目前完整流程大概做了9次左右
: 其中有兩次，壓片後，連Marker都無法顯示出來
: 我使用兩種Marker，一種是在SDS-PAGE上可顯示的，另一種是壓片時可在底片上顯示
: 其中一次，是我在壓片時，第一次有壓出來，第二次時底片不小心跟Mambrane接觸到
此時最好是把膜再拿去wash幾次 (不然底片上的化學物質不知道是否會沾上)
如果怕在加入substrate之後 訊號不夠強
可以再一次與anti-xxx-HRP (二抗) 反應一次
好吧 說我的悲慘經驗是santa cruz的substrate 因為雖然說明書上說
他的反應削弱時間很長(當然大家都這樣說自己家的產品)
但是 我用過之後 明白了 除非我的手動作非常快
再加上我的樣本可能壓片幾分鐘就搞定 不需要再重壓各幾百次
或是 我的訊號本身超級強大的狀態下 聖誕老公公都可以搞定
後來 我還是換回去MP的產品(在我很爐的自己管帳之後)..........
-----
其實聖誕牌 是我畢業後換到另一實驗室
而實驗室管理的學姊 直接問雜貨店業務(一人業務加老闆)
對方就直接賣他一堆 抗體(聖誕牌) 和比較便宜的PVDF 再加上ECL
我想很多人都一樣 會想很方便的 反正問sales 就好 作啥在去看 哪家的比較好
(至少在醫院很多是這樣 而且做實驗的搞不好跟買藥品的是不同人)
但是實際上 雖然你省了錢 省了時間 但卻花費了你的樣本 你的實驗過程
然後得到一堆 你不知道是哪裡發生問題的結果 (當然研究生就更慘烈)
再買東西的時候 我情願多花一點經費 花點時間找Paper
至少我覺得 作實驗得到結果時 開心會大於傷心
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.163.64
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 2 篇)：