Re: [求救] 請教如何分離死亡與健康的懸浮式細胞?

看板Biotech作者 (達)時間15年前 (2009/04/14 12:49), 編輯推噓2(206)
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※ 引述《AronYA ( )》之銘言: : 利用 Lenti virus 做 RNAi實驗 : 再做puromycine篩選 : 我的細胞株是懸浮式的 : puro.篩後 細胞每次繼代 : 凋亡或者不健康的細胞在離心時 : 都會跟健康的細胞一起離下來 : 進而影響繼代的品質 : 想請教有沒有人知道要利用那種溶液 : 可以將懸浮式細胞的 凋亡細胞 以及 健康細胞 分離開 : 麻煩各位了 ~ 上面推文是說可以用反覆的離心方式( 離心->去上清->回溶->recycle ) 我是沒有做過懸浮細胞 但是如果懷疑這種方式是否可以分離健康和不健康的細胞 我認為可以測試每次離心後的存活細胞比例 如 : 每次離心後將重新懸浮的細胞液取一點出來 再利用trypan blue計數存活及死亡的細胞比例 看看是否每次離心及再回溶的細胞液是否能增加健康的細胞比例 如果可以,再斟酌要離幾次(太多次應該是會loss細胞及花費太多時間) 有錯的話請多多指教~~ 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.94.184 ※ 編輯: chvkimo 來自: 163.25.94.184 (04/14 12:50)

04/14 17:26, , 1F
那請問每一次要用多少轉速 離多久 才可以有效分離 謝謝
04/14 17:26, 1F

04/14 22:40, , 2F
說實在的 這是經驗談 我們家都用1200rpm 5 min
04/14 22:40, 2F

04/14 22:41, , 3F
然後是一天離一次 觀察幾天 再離一次 如果不行就會放棄
04/14 22:41, 3F

04/15 12:31, , 4F
我建議你用G值測試 因為rotor直徑不一樣 RPM 就不一樣
04/15 12:31, 4F

04/15 12:32, , 5F
我家一般離細胞好像都是用1000rpm 或 200g (我家的離心機
04/15 12:32, 5F

04/15 12:33, , 6F
自己換算的)
04/15 12:33, 6F
※ 編輯: chvkimo 來自: 163.25.94.184 (04/15 12:33)

04/15 12:37, , 7F
離5分鐘
04/15 12:37, 7F

04/15 12:37, , 8F
所以 離心力 及 時間 也是參數之ㄧ
04/15 12:37, 8F
文章代碼(AID): #19v1NtcX (Biotech)
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