Re: [求救]EMSA基礎問題
※ 引述《reteporeh (被實驗中)》之銘言：
: 目前要進行EMSA的實驗因為之前沒做過
: 鄰近的實驗室也沒有相關的實驗技術可以詢問
: 所以只好來這請問各位前輩
: 1. 去做protein-DNA interaction 的DNA probe的序列長度有限制嗎？或者有最佳長度?
20-40 bp
最佳25-30
: 2. 我看protocol 有加poly dI dC 也有加cold unlabel probe 想請問這兩個都是
: 來當競爭子嗎？所以可以只加兩者其一或者是兩個都要加？
: 懇請有經驗的前輩可以回答一下,感激不盡 <(_ _)>...
poly dI dC:
去掉non-specific protein
因為核內有許多DNA binding protein
所以要加入non-specific oligo防止non-specifc protein黏到target protein上
cold unlabel probe:
做competition
假設protein跟lable protein會specific-binding並產生signal
再加入unlabel probe後 signal強度沒變 則代表這個signal是non-specific binding
因為加入unlabel probe後會跟label probe去競爭target protein
於是讓signal減弱或不見的情形 所以這樣才可以代表這個signal是specific binding.
--
修奇︰當我的後宮吧。 伊露莉︰好，我知道。
修奇︰你應該問我為什麼要你當我後宮吧？
伊露莉面帶像是抱歉的表情看我，然後努力裝出好奇的表情，說道︰
"是，修奇。你為何要我當你後宮呢?"
hatako:因為我想和精靈達到協調，阿~可是我不會忘記妳的，傑米妮。
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.200
推
03/18 16:21, , 1F
03/18 16:21, 1F
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 3 篇)：