Re: [求救] Western bolt有下雨痕
我第一個想法就是你的樣本有問題
因為別人做其他樣本 OK 你做其他樣本也 OK
你做這個樣本就會這樣 很可能就是樣本問題
更大膽一點推測
我覺得也可能是你 sample 純化過程中使你的 traget protein 產生了團塊／顆粒
而且你看那張 SDS PAGE 照片上其實也是有這種下雨痕 只是沒有那麼明顯
要記得, WB 的靈敏度遠高於 coomassie blue 直接染
很多東西本來就是 coomassie blue 還看不 WB 就可以染出來了
要確認問題來源可以做以下實驗：
用一個你認為不會有 traget protein 的樣本來跑(但是還是經過同樣的純化步驟）
看是不是還有那些點
拿一支無關的抗體（或是 houskeeping gene 的抗體）來跑你的 sample
另外你說高分子量區域染到的 band 為什麼 SDS PAGE 上沒看到 也是一樣的原因
就是 coomassie blue 還染不出來 抗體卻已經偵測到了
除了是不專一的辨識以外，
也可能是target protein 的 dimer trimer tetramer polymer....
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莫非定律:
到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上
補充定律:
拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考
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