Re: [問題] Western Blot 之疑問?
※ 引述《sweetapril (sweetapril)》之銘言：
: 想請問大家在做western時,
: 1. 同一批sample會壓幾次呢?? (所謂的2重複 3重複是什麼意思呢?跟n值一樣嗎)
: 若"第一次"所壓的5管sample就有想看的趨勢了,大家還會將這5管sample再壓一次嗎?
: 還是再重新收另一批sample來增加 n 值呢?
當然是重新收一批
: 2. 一抗的部份,如果overnight超過48小時,對蛋白表現會有不好的影響嗎?
: 以 Rho A 為例,之前試過O/N 16小時 --- 影像不明顯 (一抗1:500, 二抗1:5000)
: O/N 24-36小時--影像較清晰了(一抗1:500, 二抗1:5000)
我不清楚Rho A好不好壓
但是有些proteins真的不好壓.可能GAPDH非常強,壓幾秒就夠了
但是proteins卻壓到幾個小時,連加強版都拿出來用
: 3. 如果要跑分子量20-26kd,製15%的膠會比較好嗎??
: 我現在都跑12%的膠,但因為要看的分子量下方有一條很近的雜band,
: 跑到跳海了,還是沒辦法分的很開 = =///
嗯...建議你跑15%
但是15%比較不容易跑漂亮
: 4. 低分子量時,通常transfer的 伏特數和時間 是用多少呢?
: (Rho A--24kd-- 我用100V,60分鐘,這樣會太少or太久嗎?)
: 謝謝^^
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