Re: [求救] TRIZOL 抽 Plant Total RNA 量太低
※ 引述《BaMV.bbs@ptt.cc (我一個人住)》之銘言：
> 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
> 以方便板友幫您追蹤問題
> ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
> 1. 秤重 0.1 g (頂多增加到 1.5 g). 放入Tube中. 再放入液態氮中
> 2. 自液態氮中取出 Tube，磨碎後先加300 μl TRIZOL vortex,
> 再加700 μl TRIZOL
> # 我也用過研缽磨成粉後，把粉末取出來秤重，再加TRIZOL，
> 但濃度還是一樣低，不知道是不是動作不夠快
> 3. RT／15 min, 12,000 x 15 min x 4℃
> 4. 加 200 μl Chloroform. shake 15-30 s, 12,000 g x 15 min x 4℃
> 5. 加 0.5 ml isopropanel, RT／10 min
> 6. 12,000 g x 10 min x 4℃ 留pellet.
> 7. 加 1 mL 75% EtOH Wash. (可vortex讓pellet漂浮)
> 8. 7,500 g x 5 min x 4℃, 抽掉 EtOH
> 9. Air – Dry／10 min
> 10. 加 20 μl ddH2O (50℃), 回溶 20 min, 測 OD值
> 11. 取 10 μg Total RNA (最少) + 10X Buffer (TURBO) + DNase 1 μl + ddH2O，
> Total Volume 25 μl, 37℃ / 30 min
> 12. 加 2.5 μl inactivation buffer (TURBO), RT／2 min
> 13. 10,000 g x 2 min x 4℃, 取上層到 new Tube 中, 測 OD值
> 14. 合成 cDNA (因為濃度太低，所以沒有往下做)
> 感謝大家耐心看完，如果有任何建議，麻煩也寫在版上或寫信給我
> 這個步驟停了好久，有點糟糕
> 也祝大家
> 新年快樂
你要注意 你處理的sample是否是RNase-rich tissue當你研磨過成中 sample 可能會液化當中被釋出的RNase 將會吃掉你的RNA
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夢之大地 逼逼ㄟ四 █▁◤ █ █ █▁▁ █ █ ▉▉▉ █▁ █ █ █ █ █▁◤
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