[求救] TRIZOL 抽 Plant Total RNA 量太低

看板Biotech作者BaMV (我一個人住)時間15年前 (2009/01/28 13:43)推噓5(5推 0噓 7→)

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發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 1. 秤重 0.1 g (頂多增加到 1.5 g). 放入Tube中. 再放入液態氮中 2. 自液態氮中取出 Tube，磨碎後先加300 μl TRIZOL vortex, 再加700 μl TRIZOL # 我也用過研缽磨成粉後，把粉末取出來秤重，再加TRIZOL，但濃度還是一樣低，不知道是不是動作不夠快 3. RT／15 min, 12,000 x 15 min x 4℃ 4. 加 200 μl Chloroform. shake 15-30 s, 12,000 g x 15 min x 4℃ 5. 加 0.5 ml isopropanel, RT／10 min 6. 12,000 g x 10 min x 4℃ 留pellet. 7. 加 1 mL 75% EtOH Wash. (可vortex讓pellet漂浮) 8. 7,500 g x 5 min x 4℃, 抽掉 EtOH 9. Air – Dry／10 min 10. 加 20 μl ddH2O (50℃), 回溶 20 min, 測 OD值 11. 取 10 μg Total RNA (最少) + 10X Buffer (TURBO) + DNase 1 μl + ddH2O， Total Volume 25 μl, 37℃ / 30 min 12. 加 2.5 μl inactivation buffer (TURBO), RT／2 min 13. 10,000 g x 2 min x 4℃, 取上層到 new Tube 中, 測 OD值 14. 合成 cDNA (因為濃度太低，所以沒有往下做) 感謝大家耐心看完，如果有任何建議，麻煩也寫在版上或寫信給我這個步驟停了好久，有點糟糕也祝大家新年快樂 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.154.103

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sunnyting

01/28 23:03, , 1^F

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sunnyting

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aggaci

01/29 18:30, , 3^F

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