Re: [求救] transfection的疑問
※ 引述《yohko86 (光辰星)》之銘言：
: 材料+步驟:
: 目標DNA 16 ug
: VSVG 4 ug
: gag-pol 12 ug
: GFP 1.87 ug
: CaCl2 100 ul
: 加入auto ddH2O到1000ul
: 將所有的東西混合 再加入2X BBS 1000ul 反應約10分鐘
: 加到約長8分滿的293T細胞(有8ml medium)中
: 問題:
: 1.想請教各位大大們 使用retrovirus做transfection
: cell是不是一定會出現萎縮或死亡的現象呢? 萎縮是不是代表cell死掉了?
: 2.做了四次感覺很能難穩定cell狀況 有一次control的cell狀況良好且能看到螢光
: 可是實驗組的cell就萎縮和死亡 不然就是發生cell死亡+汙染
: 不知道用電的方式效率會不會比較高且穩定?
: 3.我的目標是要用retrovirus去infect U2OS cell
: 這樣還適合用電的方式做transfection嗎?
: 新手上路請大大們多多指教 有很多還不是很懂 不對或缺漏的地方請告知小弟
: 一定馬上改進 謝謝大大~
之前做和你一樣的retroviral transfection
發現有幾個很重要的地方
1.你的package cell 要很健康 293T如果看起要死要死的 就多養一兩代
直到健康再做 不然讓費時間
2.HBS等溶液請注意品質 如果閒麻煩有kit可以買 像Clontech有一組Calphospho的
transfection kit 一組分裝可以用超久
3.package cell不要種太滿 可以先種個0.5 million 等到36-48hrs
達到70%-80%滿 再transfect也可 並不限於24hr內要趕快做 但也不要超過兩天
通常細胞會大量死亡是因為你細胞太滿 medium太晚換 不然就是就是choloquine放超過
十個小時
不知道有沒有幫助
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◆ From: 76.181.242.213
推
10/27 12:18, , 1F
10/27 12:18, 1F
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