Re: [討論]想請問一下冷凍切片跟石蠟切片的比較~
※ 引述《allisa (小晴)》之銘言：
: ※ 引述《ISME0907 (ISME)》之銘言：
: : 因為之前不是做切片出身的..有幾個問題想請教一下~
: : 這兩種切片法的比較
: : 1.應用的廣泛性
: : 比如說是不是冷凍切片可以做很多染色實驗(immunostain)..但是石蠟切片只可以做
: : HE stain
: 冷凍跟石蠟都可以做免疫染色(螢光,DAB呈色) 也都可以做HE stain
: 不過像是皮膚還有一些軟組織要做HE的話 用石蠟包埋比較能完整看到結構
H&E stain是最基本的染色,兩種處理都可以染,只是步驟不同
不過如果是做免疫染色的話,通常比較偏好使用冷凍切片去做
因為冷凍切片tissue的epitope比較不受影響
: : 2.sample的薄度差異
: : 或許說..哪個靈敏度較高?
: 石蠟比較好切到很薄(6 um以下都很ok) 不過冷凍要切到6um比較難喔
因為石蠟切片block的製作過程需要脫水侵蠟
冷凍切片通常過後固定後,經過sucrose替換,再用OCT包埋成block
所以石蠟的block相對來說比較硬,可切到比較薄
不過還是要看組織的特性
我是做小鼠aorta切片,冷凍切片也有切過1μm
: : 3.保存性
: : 何者可以保存較久?
: 石蠟的蠟塊跟白片保存好的話放好幾年都沒問題 不過冷凍如果切完片了
: 不馬上染 有時候很容易tissue會有霜就會有點破碎了
石蠟的block保存的比冷凍切片好且久
不過記得要放盒子裡收好...(我的被蟑螂啃過 Orz)
: : 4.操作方便性
: : 何者較快..比較無毒性之類的
: 冷凍比較快 不管是組織脫水包埋 到染色的步驟 冷凍切片都會比較快
冷凍切片的block製作比較快,步驟也較簡單
以我的小鼠aorta來說,冷凍的tissue只要前一天用sucrose替換over-night後
隔天上OCT馬上可以切
石蠟block的脫水、侵蠟到包埋就要從早上8點做到晚上7點
不過石蠟block有用脫水機做會比較方便,但是我是用人工慢慢換 ^^"
石蠟切片的步驟會用到二甲苯,苯類的東西是芳香族,所以相對毒性比較高
所以二甲苯要在hood裡操作(不過他的毒性在lab裡算很低)
: : 印象中好像石蠟切片也可以做抗體抗原的染色實驗..但會不會因為實驗中加了甲醛
: : 雖然染色前好像會先做一些處理..但是會不會影響染色實驗壓~..還是大家再做抗體
: : 抗原染色..比較偏好冷凍切片的sample...
: 染螢光的會比較偏好用冷凍 其他還好唷 因為石蠟可以放很久 保存比較方便
: 隨時要補都還可以再拿片子出來染
: 不過不知道其他人的習慣如何 好像也有人的觀念跟你認為的差不多
也是有免疫染色可以用石蠟切片做
不過通常會先經過一個Sodium Citrate Buffer讓它的epitope活化
但是因為石蠟block裡tissue的固定液對epitope的型態有影響
所以免疫染色大部分還是用冷凍切片去做
: : 還有一個問題喔..聽說切片後的sample如果再去抽DNA或RNA..它的量都非常少..
: : 我本來以為切片實驗的過程中已加入的甲醛..不是已經破壞很多蛋白質了嗎?
: : 那DNA或RNA的量為何會減少壓?
: : 請教大家囉~
: 我覺得是因為切完片的sample如果要抽DNA RNA容易lost掉比較多 所以抽到的量才會很少
: 不過這是我的猜測
Formalin或Glutaraldehyde使蛋白質變性達到固定效果
而他們會造成DNA fragmentation和RNA damage
不過有公司出了號稱不會讓DNA、RNA受損的固定液
我是有拿了試用品,不過沒有用...所以也沒有辦法告訴你效果如何 >"<
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