[求救] 切不出insert

看板Biotech作者 (小護士的心聲)時間17年前 (2008/10/12 17:12), 編輯推噓5(5推 0噓 7→)
留言12則, 6人參與, 7年前最新討論串1/2 (看更多)
各位前輩~~~ 我想請問: 我已經將我的insert cloning到pGEM T-Easy vector(3015bp)內,plasmid 也經過定序過，確定有cloning進去 然後將整個palsmid，transformation入DH5a內， 抽取plasmid想確定是否還含有我想要的insert， 我使用RE為:EcoRI&SacI 不知道是不是因為INSERT比較短(23bp)，還是根本沒有insert 跑膠後一直沒有看到<100bp的band， 只看到一條約3000bp的band? 也問過老師，老師說 可能因為insert比較短看不見 所以 我一直在找辦法 之前也上來問過前輩們 也用過2-3%Agarose跑過 還是看不見 所以 想請教各位前輩 不知道可不可以提供我一些建議 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.173.238.163
推
10/12 17:28, , 1F
你之前的文章寫83bp？ 這差很多喔
10/12 17:28, 1F
推
10/12 18:16, , 2F
看不見的。小片段和大片段等摩爾的話﹐小片段長度不到
10/12 18:16, 2F
→
10/12 18:16, , 3F
大片段百分之一﹐自然帶的強度也不到百分之一
10/12 18:16, 3F
推
10/12 22:38, , 4F
定序 三天左右就出來了, 我待的實驗室是這樣作
10/12 22:38, 4F
推
10/13 00:03, , 5F
我也覺得定序可以很快知道
10/13 00:03, 5F
→
10/13 00:04, , 6F
另外，那你之前是怎麼樣接進去pGEMT-easy的?不是用PCR產物?
10/13 00:04, 6F
→
10/13 00:05, , 7F
之前P完應該有跑膠吧.....不過23bp真的很小，片段越小電泳
10/13 00:05, 7F
→
10/13 00:05, , 8F
越難看到.....
10/13 00:05, 8F
推
10/13 02:00, , 9F
光是抽plasmid來切 是不可能看到那條的
10/13 02:00, 9F
→
10/13 02:02, , 10F
要有多少條23bp 上面嵌有EtBr才能被看見? 不可能看的見的
10/13 02:02, 10F
→
11/11 01:03, , 11F
定序 三天左右就出來了 https://muxiv.com
11/11 01:03, 11F
→
01/03 16:46, 7年前 , 12F
要有多少條23bp 上 https://noxiv.com
01/03 16:46, 12F
‣ 更多 MDPV 的文章
文章代碼(AID): #18yR-HKg (Biotech)
‣ 更多 MDPV 的文章
文章代碼(AID): #18yR-HKg (Biotech)