※ 引述《aDnEgVeIlL.bbs@ptt.cc (觀察者)》之銘言：
> ※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
> : 對
> : 通常是 glycerol
> : 推 Invec:加對半體積已滅菌甘油 貯存於-20不會凝固 自行調整稀釋倍率
> 請問你的意思是說50 uL的抗體，自己再捕50 uL滅菌甘油進去嗎？
我想推文網友的意思就是那樣
> : 看 datasheet 上面會寫這隻抗體是溶在什麼東西裡面
> : 有 glycerol 的就是可以在 -20C 維持液態的
> 我想請問一下，如果有抗凍的，是否就比較經的起多次回溫？
重點是抗凍的不需要回溫啊
他在 -20 就是液體了 你直接取用你需要的量 其他馬上冰回去 根本不要回溫
> 結凍會損壞抗體的原因，是不是因為水的氫鍵呢？
化學忘光了 *>_<*
就我所記得的解釋是 冷凍也會造成蛋白質的變性 只是這種變性為可逆的
但是說是可逆 並不保證你解凍以後就會直接 refolding 成正確的樣子
很多時候 蛋白質溶液重複冷凍解凍會造成沉澱
我想 你絕對不想你的抗體沉澱下來吧? XD
> : 分成十個 5uL 或者是 五個 10uL 冰在 -20C
> : 用的時候拿一管出來 解凍 取用你需要的量
> : 剩下來的放 4C
> 請問不管什麼抗體，也不管有沒有抗凍，都應該這樣做嗎？
> 大家是抗體一送到就開始分裝或是先冰到-20度，等有空再分？
RTFM!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
呃 我是說，看 datasheet 啦
有的抗體還特別強調不能冷凍喔
原廠的說明真的要看清楚
> : 或者是 用的時候拿一管出來 解凍 整個泡成 working 的濃度
> : （用 BSA 或是 normal serium, 不要用牛奶, NaN3 自己斟酌） 用剩下的放 4C
> : 抗體在 4C 只要不長東西 維持半年通常沒問題
> : 基本上根據個人經驗與迷信
> : 5% normal serium + 0.01% NaN3 的抗體 working solution = 4C 金剛不壞
> 請問normal serium就是FBS嗎？
如果你用的是來自牛的抗體 那 normal serium 就可以是 FBS...........
這裡說的 normal serium 指的其實是 跟抗體來源同物種的未免疫血清
> : 或者是 用的時候拿一管出來 解凍 用買來專門溶一抗的 buffer 配好
> : 用剩下的放 4C, 甚至有些 buffer 號稱泡出來可以放室溫幾個月
> 嗯...我主要處理western，一抗二抗都丟在blocking buffer中。假設我一次只用1uL，
> 而分裝一管5 uL的話，把這5 uL全丟到blocking buffer應該很糟糕吧？
其實是 case by case
怎麼作考量的因素很多 比方說你的 抗體是什麼, buffer 是什麼
你往後的實驗日期有沒有規劃好等等
一個大原則是 血清，腹水這類型態的抗體是非常穩定的
不稀釋最好 只要不長菌／發霉（這有難度） 放在 4C 幾個月都活跳跳
相對的 純化過的抗體 穩定程度就差很多了
如果不冷凍 寧可盡快泡到適當的 working buffer 裡面
> 所以我應該一次取 1 ul，剩下沒用到的就放 "4度C" ，而不是 "-20度C" ，請問
> 這樣對嗎？還是說要再捕一些你說的NaN3呢？
看你
不過不稀釋的話 加 NaN3 那麼一點點 有難度吧
再次強調 Datasheet 一定要看
有些產品裡面就有 NaN3 （或是其他抑菌劑）了 這就解決了一切苦惱
但是另外要注意 NaN3 會干擾 HRP 的效果
所以如果二抗是用 HRP 而一抗裡面有 NaN3, wash 要特別確實
而 HRP 的二抗當然是絕對不能加 NaN3
> 另外就是，我希望我的western 一抗要reuse，既然都已經丟到blocking buffer中了，
> 也是擺4度C而不是擺-20度C嗎？ 同樣要另外補NaN3嗎？
blocking buffer 不要用牛奶
強烈建議要加 NaN3
運氣好的話可以用很久很久
--
PTT 的推文站外看不到
本文來自生科站（telnet://140.114.98.20）
故 勿推此文
另提供即時通生物科技相關諮詢服務，每小時十五美金，請支付予聯合勸募
意者請連絡 boblutw ＠ hotmail.com
--
※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: 97-112-76-89.dlth.qwest.net
討論串 (同標題文章)
以下文章回應了本文：
完整討論串 (本文為第 4 之 5 篇)：