Re: [求救] p-Akt
試試看Pierce的ECL NANO or Pico
不同細胞本來就不能比阿，表現量很可能不同，
多一點protein，換high sensitive ECL，
壓片久一點，
然後去買好一點的X FILE，
加油吧！
※ 引述《lorna184 (小宛)》之銘言：
: > <....我的p-Akt一直跑不出來...
: 希望版上的大大可以提供一下寶貴的意見 > <
: 小妹原本用cell signal的p-Akt,但是壓出來片子超乾淨的說
: 後來再try幾次,它終於有一點點出現(真的只是一點點),還壓了一個多小時
: 以為抗體有問題,所以就try它們的positive control是有成功的
: 所以想說會不會因為所有的東西都是for它們的,所以買了abcam的抗體來try
: 結果........是一樣的,所以抗體方面是沒問題的,但一點疑惑就是,
: 兩種抗體都是for human 和 mouse,我們用相同的條件做老鼠和人類
: 老鼠的band超明顯,但是人類就不行了,接著就開始尋找問題,
: 想說會不會是milk或是BSA的濃度太高,以至於把membrane的空缺都給補滿了,
: 所以抗體才抓不上去,原本用 5%安佳blocking 1hr,一抗(1:1000)in 5%BSA 4℃ overnight
: ,二抗(1:1000)in 5%安佳 RT 1hr
: 後來嘗試 3%安佳blocking 30 min 或不blocking,一抗in 1% or 5%BSA RT 2hr,
: 二抗都是in 5%安佳,而BSA也用過sigma兩種不同cat.來try,結果.....................
: .........都是一樣的.......壓了一個多小時.......有加刺激劑的都超淡淡淡淡淡淡
: 不知道版上的各位..> <...可以提供小妹其它的做法....感激不盡!!!!!!!
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過去的來不及追憶 現在的趕不及接受
得到的不懂得珍惜 失去的無法能忘記
這就是生活嗎？！
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07/06 10:52, , 1F
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