Re: [求救] p-Akt

看板Biotech作者 (小宛)時間17年前 (2008/07/04 15:11), 編輯推噓4(403)
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>推 lail:1抗濃度增加,再不行就試看看2抗o/n(濃度不變),參考參考囉^^ 07/04 12:34 >推 konlon:用用MILLIPORE的ECL市試試看 07/04 12:56 >推 tsubasawolfy:protein怎麼收的? 07/04 13:54 我是從fresh blood分離neutrophils,和刺激劑處理過細胞後, 離心,接著加入lysis buffer後,離心取上清液使用. 請問,會是我的sample製作的過程有問題嗎?? >推 adagoddess:一抗 (1:500) over night,隔天回溫久一點(2hr) 07/04 14:16 >→ adagoddess:Wash時間次數減少,二抗上久一點(2hr)。試試看吧 07/04 14:18 >推 liuse:你load多少protein 太少不行的 cell-type也有差 07/04 14:21 >→ liuse:cell signalling賣的很好用阿 我們這邊也常用 我load 20 ug的protein -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.108.117

07/04 15:35, , 1F
lysis完後sonication會更好ˊˇˋ
07/04 15:35, 1F

07/04 15:38, , 2F
我有sonnicate 20w, 3sec, cycle 最小
07/04 15:38, 2F

07/04 15:40, , 3F
那phosphatase inhibitor也有加@@?
07/04 15:40, 3F

07/04 16:14, , 4F
恩恩...加了PMSF和兩種sigma賣的cocktail
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07/04 19:33, , 5F
增加protein的量試試看,20ug我個人認為不夠,
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07/04 19:34, , 6F
尤其又是壓磷酸化的東西,多辛苦試試看吧~
07/04 19:34, 6F

07/04 23:27, , 7F
用30ug試試看 然後壓久一點
07/04 23:27, 7F
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