Re: [求救] mutant-enriched PCR 文章問題
※ 引述《albertwang (會思考的魚)》之銘言：
: ※ 引述《linker0726 (哀..煩阿)》之銘言：
: : http://clincancerres.aacrjournals.org/cgi/content/full/12/1/43
: : 我看了這篇文章
: : 有一個地方很不解
: : 就是他Fig. 2跑Gel時確認時，本來WT的不是已經用限制酶切過了(配合Fig. 1)
: : 應該是會斷成好幾個片段(應該是兩個)
: : 為什麼到這邊就變原來的一段了呢~?
: : 註:WT分別是A圖的138bp和B圖的130bp
: : 感謝
: 首先我在對全部基因的seq時發現一件事情
: paper上的enon跟NCBI genebank不同剛好跳一下
: 在 paper 在 NCBI
: exon19 等於 EXON21
: exon21 等於 EXON23
: 這是一件粉神奇的事情
: 一開始我以為是isoform
: 但是剛剛再卻確認一次(不過有可能我太累了 有高手幫指正)
: 還是一樣
: 再來你的疑問
: 這不困難重點在他的primer設計
: NC_000007.這是基因的代號NCBI的
: EXON 21
: ATCCCAGAAGGTGAGAAAG(aTAA)AATTCccgtcgctatcaaggaattaagagaagcaacatctccgaaagccaaca
: aggaaatcctcgatgtgagtttctgctttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcagg
: EXON23
: cagccaggaacgtactggtgaaaacacCGCAGCATGTCAAGATCACAGATtttgggc(tggcca)aactgctgggtgc
: ggaagagaaagaataccatgcagaaggaggcaaagtaaggaggtggctttaggtcagcc
: AGCATTTTCCTGACACCAGGGA
: 大寫部分是primer
: ()部分是限制每
: 他對限制脢改變所以pcr結果會出現圖2
: 至於圖1陷阱需要看實驗方法才能董
: 這你就自己讀一下囉
: 呵呵加油
圖一有陷阱?
其實我看不懂圖一最後Wild的畫法 好幾條虛線代表什麼?
而且跑完第一次PCR用限制酶切後
到底第二次PCR時會不會再放大 它好像也沒講到
我覺得圖二應該跟圖一之後無關 他只是要測它的敏感度
所以用WT下去稀釋 直接下去跑PCR 然後用同樣的限制酶切
這邊看來 好像第一次PCR完用限制酶切 之後好像會在黏回去?
不過不知道會不會再放大?
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