Re: [求救] 關於western blotting時觀測phospho pr …
※ 引述《lail (逃避不是辦法阿)》之銘言：
: 前面看到有板有在推文中提到
: western要辨認磷酸化蛋白質時
: 比較不建議用脫脂牛奶blocking
: 建議用BSA blocking
: 剛好最近我也在看不同的磷酸化蛋白質
: 其中我觀察的p-JNK訊號非常弱
: 雖然我要比較的差異一直存在
: 但是整體而言訊號弱到我需要一抗二抗濃度加強
: 二抗作用時間也需要加長
: 這樣的現象會是因為我用脫脂牛奶blocking有關嗎?
: 我若改用BSA blocking會改善嗎?
: 另外,使用的BSA是用哪種溶劑泡呢(1X TBS? TBST?)
: 謝謝^^
用牛奶也可以阿
你的磷酸化抗體是哪一家的
如果是聖誕老公公的 我為你默哀...
我用聖誕老公公的抗體壓兩個月都壓不好...
但是借用隔壁實驗室cell signaling的抗體
壓一分鐘左右就出來了 訊號還不錯
如果還是要用聖誕老公公的抗體的話
我學長的做法 一抗overnight(冷房) 二抗3~4小時
wash久一點 ECL後壓片20~30分鐘 如果還是沒訊號...
那就重新跑一片吧 感覺聖誕老公公的磷酸化抗體很兩光
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◆ From: 163.25.118.177
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04/27 11:09, , 1F
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05/06 17:45, , 2F
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