Re: 有關純化的問題

看板Biotech作者 (小提琴的連弓真的好難阿)時間17年前 (2008/04/17 15:58), 編輯推噓2(2推 0噓 3→)
留言5則, 3人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
※ 引述《aggaci (小提琴的連弓真的好難阿)》之銘言： 最近從pichia medium收集蛋白質 因為量太多了 所以我用80%的硫酸銨把它抓下來後 過nickle resin進行純化 等到我覺得我洗的很乾淨了，再以高濃度的imidazole 進行 elution 出來的都黃黃的，根據以前的經驗，通常降子蛋白質都很多 但是以20 micrliter跑電泳只有一點點，沒什麼雜蛋白 (western blot結果是有東西的) 後來拿去dialysis 顏色也沒變淡..... 那顏色到底是什麼造成的？(濃縮後變成深咖啡色) 拿去用BCA測濃度 測出來有10mg/ml.........Orz.. 拿來跑電泳根本沒那麼多 因為我第一次做皮奇亞的實驗，所以很多都不太懂 有沒有高手能指導一下哩 謝謝 -- http://www.wretch.cc/blog/aggaci -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165
推
04/17 02:16,
probably contains metal(s). Use UV-VIS to test OD 300-500
04/17 02:16
直接測嗎？不需要加任何reagent嗎？
推
04/17 07:52,
這東西超臭的XDDD 原po原敲完硫銨、透析後有過mino-pore??
04/17 07:52
→
04/17 07:53,
那些可能是代謝產物,畢竟這是可以長到OD600=200的菌
04/17 07:53
→
04/17 07:55,
而且產量不高的原因很多,medium.菌株.methonal誘導時間,etc.
04/17 07:55
→
04/17 07:56,
更正 mini-pore, methanol (爛鍵盤害我一直打錯= = )
04/17 07:56
請問你說的是過0.2 filter嗎？
推
04/17 11:37,
當初transfromation時候 有用Zeocine挑表現量較高的菌株嗎
04/17 11:37
我的vector是pPIC9，不是抗zeocine 當初有幾顆都有表現(小量) 我是挑表現量最多的去大量表現 而且很多都在胞內....Orz..有種衝動想把他打破純化...="=
推
04/17 12:49,
哇~ 本尊都推文了
04/17 12:49
-- http://www.wretch.cc/blog/aggaci -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165
推
04/17 21:13, , 1F
打破純化你會哭... 雜蛋白質多到要extra colunm來去除
04/17 21:13, 1F
推
04/17 23:51, , 2F
分泌蛋白的glycosylation也要考慮 多年前我看過paper
04/17 23:51, 2F
→
04/17 23:54, , 3F
有提到glycoprotein比較不易被comassive blue染出來...
04/17 23:54, 3F
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04/18 01:49, , 4F
真的嗎？！？請問是哪一篇paper...?明天我來找找看，找不到
04/18 01:49, 4F
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04/18 01:50, , 5F
再請教你~~
04/18 01:50, 5F
‣ 更多 aggaci 的文章
文章代碼(AID): #181mD2Fh (Biotech)
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