有關純化的問題

看板Biotech作者 (小提琴的連弓真的好難阿)時間17年前 (2008/04/17 00:44), 編輯推噓4(403)
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最近從pichia medium收集蛋白質 因為量太多了 所以我用80%的硫酸銨把它抓下來後 過nickle resin進行純化 等到我覺得我洗的很乾淨了,再以高濃度的imidazole 進行 elution 出來的都黃黃的,根據以前的經驗,通常降子蛋白質都很多 但是以20 micrliter跑電泳只有一點點,沒什麼雜蛋白 (western blot結果是有東西的) 後來拿去dialysis 顏色也沒變淡..... 那顏色到底是什麼造成的?(濃縮後變成深咖啡色) 拿去用BCA測濃度 測出來有10mg/ml.........Orz.. 拿來跑電泳根本沒那麼多 因為我第一次做皮奇亞的實驗,所以很多都不太懂 有沒有高手能指導一下哩 謝謝 -- http://www.wretch.cc/blog/aggaci -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165

04/17 02:16, , 1F
probably contains metal(s). Use UV-VIS to test OD 300-500
04/17 02:16, 1F

04/17 07:52, , 2F
這東西超臭的XDDD 原po原敲完硫銨、透析後有過mino-pore??
04/17 07:52, 2F

04/17 07:53, , 3F
那些可能是代謝產物,畢竟這是可以長到OD600=200的菌
04/17 07:53, 3F

04/17 07:55, , 4F
而且產量不高的原因很多,medium.菌株.methonal誘導時間,etc.
04/17 07:55, 4F

04/17 07:56, , 5F
更正 mini-pore, methanol (爛鍵盤害我一直打錯= = )
04/17 07:56, 5F

04/17 11:37, , 6F
當初transfromation時候 有用Zeocine挑表現量較高的菌株嗎
04/17 11:37, 6F

04/17 12:49, , 7F
哇~ 本尊都推文了
04/17 12:49, 7F
文章代碼(AID): #181Yq85u (Biotech)
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