有關純化的問題
最近從pichia medium收集蛋白質
因為量太多了
所以我用80%的硫酸銨把它抓下來後
過nickle resin進行純化
等到我覺得我洗的很乾淨了,再以高濃度的imidazole 進行 elution
出來的都黃黃的,根據以前的經驗,通常降子蛋白質都很多
但是以20 micrliter跑電泳只有一點點,沒什麼雜蛋白
(western blot結果是有東西的)
後來拿去dialysis 顏色也沒變淡.....
那顏色到底是什麼造成的?(濃縮後變成深咖啡色)
拿去用BCA測濃度 測出來有10mg/ml.........Orz..
拿來跑電泳根本沒那麼多
因為我第一次做皮奇亞的實驗,所以很多都不太懂
有沒有高手能指導一下哩
謝謝
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