Re: [求救] 請問SDS的tris buffer為什麼會不好滴定?
※ 引述《LIAR (墮天使)》之銘言:
: western有很多buffer,我的老師(別的實驗室)要求他的學生所有buffer自己配,
: 連老師自己也是自己配,所以我也是自己google後自己配,不過光只有tris的話還
: 好,用HCl滴定沒問題。
: 但只要有加SDS,pH meter就變得很不敏感,雖然有攪拌,但明明滴了不少HCl,
: 但pH meter卻沒變化,把pH meter拿起來重新用dd H2O水沖過再重測才會看到變化,
: 而且很快又會定住,所以一直定不準。
: 老師說tris直接定好再加SDS也可以,不過我想說最後pH比較準,而且加一堆東西後
: 會不會改變pH也不曉得,我的配方也是最後才加一句
: "check the pH and bring it to pH 6.8"
: 所以想請問有人滴定過含SDS的buffer遇過我這種問題嗎?請問怎麼解決呢?
我猜測你應該是配SDS-PAGE running buffer,
這個步驟建議按照配方將各藥品按照配方配置溶解而不要調整PH值,
通常這時候的PH值應該在8.3附近,
這時候加HCL會改變離子強度, 本來應該1hr結束的可能就提前結束.
如果是配上層的pH6.8或下層的pH8.8 Tris buffer,
請不用加SDS去調整,
如果看配方, 通常都是個別泡好, 配膠時才混在一起,
如果是廠商提供的premixed buffer, 也會發現Tris buffer 與SDS是分開提供.
我想可能就是有這樣的因素在吧?
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