[求救] 請問SDS的tris buffer為什麼會不好滴定?

看板Biotech作者 (墮天使)時間16年前 (2008/03/28 22:10), 編輯推噓10(10014)
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western有很多buffer,我的老師(別的實驗室)要求他的學生所有buffer自己配, 連老師自己也是自己配,所以我也是自己google後自己配,不過光只有tris的話還 好,用HCl滴定沒問題。 但只要有加SDS,pH meter就變得很不敏感,雖然有攪拌,但明明滴了不少HCl, 但pH meter卻沒變化,把pH meter拿起來重新用dd H2O水沖過再重測才會看到變化, 而且很快又會定住,所以一直定不準。 老師說tris直接定好再加SDS也可以,不過我想說最後pH比較準,而且加一堆東西後 會不會改變pH也不曉得,我的配方也是最後才加一句 "check the pH and bring it to pH 6.8" 所以想請問有人滴定過含SDS的buffer遇過我這種問題嗎?請問怎麼解決呢? -- 太初有道,道與耶和華同在,道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。 萬物乃藉祂所造,凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭, 這生命就是人的光。光照在黑暗裡,黑暗卻不接受光。 吾輩乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦誘惑,回歸黑暗。 我不斷地徘徊於光明與黑暗之間,從被造之日至今,又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.3.78

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TRIS有出專用的PH meter 貴很多,聽說比較準,我沒用
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光tris還要用專用pH meter啊?不是只要溫度補償就好?
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我用一般的定也不會像你一樣 最多幅度跳動點大
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western blot什麼buffer需要加SDS而且還要調pH值的?
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sample buffer、running buffer、transfer...
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我的不是跳動有點大,是根本不跳嘛!沒SDS就沒問題。
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不需要調吧?至少我沒調過,也沒聽說過(你是第一個)
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怎麼會有SDS-PAGE不用調pH啊?
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Tris buffer主要的目的要穩定pH(所以才叫buffer阿),因此只
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需要在準備stock時調好pH就好,不需要配好後又時時刻刻調pH
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推樓上,Tris本來就是緩衝用的
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一般實驗室就會準備pH6.8~8.5的Tris-HCI的stock備用,或者以
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HEPES-KOH做類似功能的替代
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不過有些buffer的tris很稀,這樣先調好的不會被其他成份
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加進去後而改變嗎?
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我實驗室的,都是加一加藥,定量體積,攪一攪全溶, 就可以.
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好久沒測pH值..
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所以alaric也是有各種pH的TRIS配好stock囉?
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我是調好pH才加SDS欸 目前為止跑起來沒問題
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配Tris buffer沒在加SDS(8.8 and 6.8) 做膠時才另外
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加入10%SDS buffer 而且量很稀 我是覺得不會變動到
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pH EX:TRIS體積3.8ml:10%SDS體積150uL
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Tris先定好 就把藥加一加+1
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用試紙阿...:P
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文章代碼(AID): #17xFnVem (Biotech)
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