Re: [求救] cell cycle的問題
其實我沒有像您學長說的那樣做。
不過我們fix的reagent是cold MeOH，
而且我是一邊vortex(5~6)一邊"直接滴到細胞"的溶液，並沒有延著管壁。
在顯微鏡下觀察時，
細胞收下來前看，
如果飄的細胞很多，才會有細胞碎片從flow的data看到
如果細胞都貼得很好例如control組，幾乎很難看到碎片
所以我覺得細胞破片多，主要還是細胞的condition有問題耶o_o
參考一下...我的經驗啦^^a"
※ 引述《kakaman (日子過的真快阿)》之銘言：
: ※ 引述《lausDeo (絕種的白色軟糖)》之銘言：
: : 最近開始做cell cycle
: : 然後用flow看cell cycle情形
: : 不過遇到一些問題
: : 就是說flow看的結果是細胞都變成破片了
: : 但在6-well細胞還沒passage起來前用顯微鏡看存活的細胞還算滿多的
: : 明顯是後來的處理使細胞破碎
: : 我想問的是這個步驟：滴入酒精以固定細胞
: : 這個時候滴70%酒精有必要"沿著管壁"一滴一滴滴嗎？
: : 還是可以直接滴到細胞沒有關係呢？
: : 還有這時候滴酒精的速度大概是要多慢才算可以呀？
: : 這時候手都好酸...
: : 感謝回答囉
: 學長教我的做法是
: 以70%冰酒精延著管壁滴
: 一次兩三滴 接著用手shaking一下 然後繼續滴酒精
: 不要直接滴到細胞 學長說這樣子效果比較不好
: 如果怕手酸 可以把離心管放在vortex那台機器上
: vortex的速度要調慢 延著管壁一次滴一滴
: 以上是一點經驗談 我上禮拜也是第一次跑flow
: 加油~~
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