[求救] 請問DIG High Prime DNA Labeling and …
初次使用DIG High Prime DNA Labeling and Detection starter Kit這套kit
不知板上有沒有人用過這一套southern blotting的kit
想請教一些問題
1.Probe labeling的製作，label後的probe是不是一定要馬上開始進行hybridization??
沒用的可以保存多久呀??
2.進行transfer時，如何使我的模板dna變性??
我的DNA是經由酵素切割後的Cchromosome DNA@@
後來參考一些資料後的作法
1.Gel 用dd H2O洗過
2.Wash gel in 0.25 M HCl 、30分
3.倒掉HCl、以dd H2O rinse
4.Wash gel in (0.5 M NaOH, 1.5 M NaCl) 、20分
使DNA形成單股
5.倒掉液體、以dd H2O rinse
6.再重覆一次4-5
7.Wash gel in (0.5 M Tris pH 7.0, 3.0 M NaCl) 、20分
8.倒掉液體、以dd H2O rinse
9.再重覆一次7-8
接著就用0.4N NaOH作 transfer.....為何用NaOH...老闆說的所以就先試試羅
3.pre- hybridization後呀~是否要將多餘的Dig Easy Hyb洗掉才能進行接下來的步驟??
要洗~那要用什麼洗呢??因為他說明書沒寫到~所以還蠻疑問的!!
以上問題~感謝大家花時間看~
麻煩幫我解答一下~
感激不盡唷
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.38.110
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※ 編輯: bbiioo 來自: 140.130.38.110 (03/20 23:42)
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