Re: [求救] 定序問題求救~~~~
小的意見是...可能得麻煩你做幾個步驟確認一下:
第一:這次實驗的方法步驟都跟之前可以定序出來的都一樣嗎? 還是有不同的地方?
第二:在你的實驗敘述中, 你GEL上有BAND表示你PCR沒問題, 但你定序不出來, 表示...
可能在你GEL EXTRACTION的部份是不是有問題? 因為你所謂的全軍覆沒...是指沒
東西? 還是雜訊很多呢? 如果沒東西, 表示你送的那些GEL EXTRACTION後的產物也
許都流失掉了, 所以, 造在定序公司那邊, 他要再P一次會P不出東西~也就會沒有
訊號產生了! 那如果雜訊很多, 這就比較麻煩, 原因可能就很多了, 定序公司的
能力也是一個問題, 還有你在GEL EXTRACTION時純化的部份也有可能出問題, 因此
我想~你可以再做一次實驗, 然後從你原本GEL EXTRACTION產物再P一次(這就是自己
去做確認, 是不是真的可以P出東西來)然後再跑GEL, 如果, 跑出來的結果是有你
要的BAND 那~恭喜, 至少可以知道你GEL EXTRACTION KIT應該沒問題, 如果這樣~
理論上定序應該也不至於啥都沒有!! 然後, 就可以跟定序公司的業務討論, 為啥
會這樣(雜訊大, 也可以問一下定序公司, 是啥原因造成的Buffer? 純度? or???)
我想~這樣你應該可以比較清楚問題發生在哪~~~ 祝你順利吧!!
※ 引述《rvnkhlnomgtl (或許天堂也常日落)》之銘言：
: 最近忙著定序的工作
: 我們實驗室的習慣是,先PCR後跑電泳,再切下band送定序
: 但不知道為什麼,電泳圖明明顯示清楚的條帶,我也保證切膠的過程與保存沒有問題
: 但源資(定序公司)竟然送來的資料是全軍覆沒....讓我沒法接受
: 打電話去公司說請我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大
: (總共有39管)
: 實在很不好意思拿著定序服務失敗的收據單給老闆簽名啊!!!!
: 所以想請問大家...電泳圖能拍得出來並切下該條帶的膠送定序沒法定序的情況是
: 有可能發生的嗎???
: 另外想請問大家都是給哪一家定序的呢?
: 明欣的風評如何呢?如果可以也順便給我報個價~~~謝謝~
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