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討論串[求救] 定序問題求救~~~~
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#4
Re: [求救] 定序問題求救~~~~
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者jepy (提起精神ㄚ)時間18年前 (2008/03/18 21:24), 編輯資訊
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小的意見是...可能得麻煩你做幾個步驟確認一下:. 第一:這次實驗的方法步驟都跟之前可以定序出來的都一樣嗎? 還是有不同的地方?. 第二:在你的實驗敘述中, 你GEL上有BAND表示你PCR沒問題, 但你定序不出來, 表示.... 可能在你GEL EXTRACTION的部份是不是有問題? 因為你所謂
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#3
Re: [求救] 定序問題求救~~~~
推噓5(5推 0噓 1→)留言6則，0人參與, 最新作者cloneting (1ting)時間18年前 (2008/03/12 18:07), 編輯資訊
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可能是你給的primer不適合定序. 定序機器限制 primer的Tm最好是50-55度. 如果PCR出來兩三條band 不純化直接TA cloning. 再去colony PCR去挑含有你要的目標片段會比較容易. 我也曾先挖膠純化後在TA cloning 不知道為什麼做不出來. 但如果不先純化 直
#2
Re: [求救] 定序問題求救~~~~
推噓1(1推 0噓 3→)留言4則，0人參與, 最新作者rangelovero ( L'Arc~en~Ciel)時間18年前 (2008/03/11 23:14), 編輯資訊
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我之前有過類似經驗. PCR產物有兩三條BAND(當中包含我的目標大小). 所以很自然地就挖膠純化所要的片段. 接著再進行TA CLONING→定序. 不過不管作幾次就是無法 TA 成功 (平常 TA cloning 是很基本的工作). 於是退而求其次 直接將純化完的產物送定序. 也就是跟你一樣的步
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#1
[求救] 定序問題求救~~~~
推噓8(8推 0噓 8→)留言16則，0人參與, 最新作者rvnkhlnomgtl (或許天堂也常日落)時間18年前 (2008/03/11 22:20), 編輯資訊
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最近忙著定序的工作. 我們實驗室的習慣是,先PCR後跑電泳,再切下band送定序. 但不知道為什麼,電泳圖明明顯示清楚的條帶,我也保證切膠的過程與保存沒有問題. 但源資(定序公司)竟然送來的資料是全軍覆沒....讓我沒法接受. 打電話去公司說請我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大. (
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