Re: [求救] deletion情況的primer設計

看板Biotech作者 (skylawer)時間18年前 (2008/01/29 19:35), 編輯推噓2(202)
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※ 引述《cyken (Ken)》之銘言: : |<del>| : 5'atacatatatgtac...tgtacaggtagcaatatacagtacacagaaacatctgc...aatacccctgaacat 3' <-------------- primer 1 : 3'tatgtatatacatg...acatgtccatcgttatatgtcatgtgtctttgtagacg...ttatggggacttgta 5' -----------------> primer 2 step 1: PCR amplify (using ultra-pfu) step 2: DpnI digest (remove template DNA) step 3: clean up step 4: self ligation step 5: transform into competent cell 只須一天工與一對primer , 就可以得到你要的東西 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.66.215

01/29 21:44, , 1F
blunt end要self ligation似乎會有太多結果啊...
01/29 21:44, 1F

01/29 21:57, , 2F
不會有很多種結果 只有成功與失敗這兩種結果.
01/29 21:57, 2F

01/29 22:53, , 3F
這不好,把primer1,2的5'分別增加primer2,1約10~15mer的長度
01/29 22:53, 3F

01/29 22:56, , 4F
這樣template就可以互補,而且只需要step 1,2,5就可成功
01/29 22:56, 4F
文章代碼(AID): #17dmzj2D (Biotech)
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