Re: [求救]Protein從SDS-PAGEtransfer至PVDF的問題
※ 引述《willieh (willie)》之銘言：
: 請問各位，
: 我在做SDS-PAGE transfer至PVDF時，
: 發現我的Pre-stained marker變得很淡，
: 因此想請教各位，
: protein有可能transfer過頭而離開PVDF嗎？
: 還是變淡是因為染劑脫離protein而已？
嗯嗯，我想我說一下我的情況好了，
我是用濕式transfer，8x6 cm的PVDF，400 mA，60 mins
buffer含25mM Tris, 192mM glycine, 0.1% SDS, 15% methanol。
因為pre-stained marker在PAGE上非常清楚，
但是在transfer後幾乎沒有了，
PVDF上淡的可憐....
因此想到幾個問題：
會不會是transfer過頭了？
但是在PVDF上的protein會容易過頭嗎？還是只是染劑跟protein脫離？
當然推文的sGoat您說gel跟membrane非密合這點我也蠻同意....
還有其他可能或建議嗎？
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.121
※ 編輯: willieh 來自: 140.116.253.121 (01/12 21:26)
推
01/12 21:31, , 1F
01/12 21:31, 1F
推
01/12 22:16, , 2F
01/12 22:16, 2F
推
01/12 22:17, , 3F
01/12 22:17, 3F
推
01/12 22:30, , 4F
01/12 22:30, 4F
→
01/12 22:32, , 5F
01/12 22:32, 5F
※ 編輯: willieh 來自: 125.229.44.153 (01/13 00:14)
→
01/13 00:14, , 6F
01/13 00:14, 6F
推
01/13 03:31, , 7F
01/13 03:31, 7F
推
01/13 12:29, , 8F
01/13 12:29, 8F
→
01/13 15:25, , 9F
01/13 15:25, 9F
推
01/13 18:59, , 10F
01/13 18:59, 10F
推
01/13 20:58, , 11F
01/13 20:58, 11F
→
01/14 20:45, , 12F
01/14 20:45, 12F
→
01/14 20:46, , 13F
01/14 20:46, 13F
討論串 (同標題文章)