Re: [求救]關於DNA fragmentation
我提供我們實驗室做的方式
※ 引述《cutebetty (Qb)》之銘言：
: 以下是我在網路上找到的方法
: 我有用過是可以的 有興趣沒錢買kit的可以試試看
: 4x10(6次方) target cells collect the cell sample in 1.5 ml eppendorf tube
: --> spin down
: --> resuspend with 0.5 ml PBS in 1.5 ml eppendorf tubes 55ul of lysis buffer
: (40 ml of 0.5 M EDTA / 5 ml of 1 M Tris-Cl buffer pH 8.0 /
: 5 ml of 100% Triton X-100 / 50 ml of H2O)
細胞收集後先wash 一次
lysis buffer 我們用的濃度比較低
5mL 1M Tris-HCl pH8.0
5mL 0.5M EDTA
4.38g NaCl
2.5mL Triton X-100
in 500mL
每個tube加1mL
加完lysis buffer之後 直接放冰上30-60min
冰上之後 加入等體積的 (phenol/chloroform/Isoamyl alcohol 25:24:1)溶液
votex ,會有明顯乳白和水層兩層
以 13000rpm離心2-3min 中間會出現白色一層
取上層液 加入另一eppendorff中
再加入大約等體積chloroform , votex 以 13000rpm離心2-3min
取上層液 再加入大約兩倍體積100% EtOH ,1/10V NaoAc
mix 後, -20度 沉澱至少半小時以上
取出離心13000rpm , 10min
去掉液體之後, 用70%EtOH wash一次
air dry
乾了之後 以含有RNase的ddH2O回溶大概 10-15ul的volume
放入37度水浴2hr
之後就可以用2% agarose gel 電泳
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◆ From: 61.223.96.177
※ 編輯: Seal13 來自: 61.223.96.177 (01/07 22:04)
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