Re: [求救＞＞為什麼用pCRII-TOPO cloning vector꘠…
※ 引述《bluecsky (我要藍藍淡淡的天空)》之銘言：
: ※ 引述《seal0413 (seal)》之銘言：
: : pCRII-TOPO聽說是最好接也較貴的cloning系統
: : 我的pcr product 大約 140bp左右
: : 我挑藍白有挑到
: : 抽plasmid 也有比vector高一點(我跑膠跑0.8%且第一條DYE跳海後又多跑一下)
: : 只是去切enzyme ECO1(VECTOR上的)
: : 就怎樣也切不出 140bp左右的位置
: : 請各位有用過TOPO的大大幫忙
: : 感謝不盡^^
: 這個TA kit我有用過
: 我都是直接拿M13 forward primer + insert forward primer跟
: M13 reverse primer + insert forward primer(因為有正接跟反接)
: 直接做PCR screening
: 然後就把positive的抓去送定序了
: 至於跑gel的話..沒記錯的話
: TOPO約5.7k..你才多140bp..要明顯的分出來好像有點難
: 然後如果你真的想要明顯看到有140bp的話
: 建議把gel濃度提高到3%以上(我會跑6%的拉XD)..這樣100多bp的都可以很明顯的看到
感謝你的意見
只是如果切不下來
那後續實驗可能就不能做了
我挑幾個有跳高的(約35個)
通通切不動
可是明明就比vector高><"
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◆ From: 140.128.140.71
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