[求救] 我的western><~~~~~~~~
小妹的western已經一個月了....
押出來全部都是空白片@@.....
後來受不了了><
這禮拜把啥都試了....
60 ug sanple
膜上有蛋白~所以transfer沒問題
以一抗 actin 為例 overnight 4度
二抗 anti-mouse IgG 1:5000 2~3小時
柏森的ECL 加了之後約15分鐘路程...壓片---> 空白
今天把ECL拿到暗房加
發現...是有band的....
加了ECL後...有很亮的band...但是過一下下就不見了
壓片時也只有弱到快不見的的痕跡
為啥會這樣呢????
這和我之前的條件都一樣..但是之前壓出來的片很漂亮
自從某次之後都在也壓不出來了...全都是很乾淨的空白片
參考板上說的...是不是2抗太濃??
但是之前作也是1:5000也很OK阿
請問各位先進~~~還有什麼原因呢???
之前用一樣的條件都是在實驗室加完ECL後去壓片
因為等電梯所以約30分鐘
但壓出來還是很漂亮阿
而且都還是用弘晉ECL
但是最近是怎麼都做不出來....
我已經到了疑心疑鬼的地步了><~~~
嗚~~~哪位好心人可以告訴我到底為什麼><~~~~~~~~~
上帝一定會非常保佑您的><~~~~~~
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